集群酶标记物的研究及其在化学发光免疫分析中的应用

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本文围绕一种基于介孔二氧化硅纳米粒子作为集群酶标记物载体的制备以及其在化学发光免疫分析方面的应用展开。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay CLIA)因其同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高选择性,使其在免疫分析方法中应用越来越广泛。而基于纳米粒子作为集群酶标记物的免疫分析方法则是一个新兴的研究课题。全文由两章组成:第1章:综述这一章主要介绍了化学发光免疫分析的研究进展,重点总结了集群标记物在免疫分析中的应用。第2章:研究报告研究报告包括四个部分的内容:1.介孔二氧化硅纳米粒子的合成和表征合成了粒径在70±10nm的介孔二氧化硅纳米粒子,并对其形貌、粒径进行了透射电镜的表征,发现所合成的纳米粒子孔径均一、粒径较均匀、分散性良好,适合作为酶、抗体等生物样品的标记载体。2.基于介孔二氧化硅纳米粒子作为集群酶标记物的超灵敏的化学发光传感器测定癌胚抗原建立了一种超灵敏的基于辣根过氧化物酶标记介孔二氧化硅纳米粒子的集群酶标记物的化学发光免疫分析传感器检测癌胚抗原的方法。首先通过3-氨丙基三乙氧基硅烷将介孔二氧化硅表面进行氨基硅烷化,然后利用戊二醛法将辣根过氧化物酶和癌胚抗原二抗同时固定于纳米粒子表面形成MSN-HRP-Ab2复合物。由于介孔二氧化硅纳米粒子的大比表面积增大了免疫反应中HRP的量,因此大大增强了化学发光信号,提高了方法的灵敏度。该方法简单、低成本、灵敏度高并且成功应用于血清中癌胚抗原的检测。灵敏度比传统的免疫分析方法提高了10倍。3.基于介孔二氧化硅纳米粒子作为集群酶标记物的化学发光免疫分析检测金黄色葡萄球菌肠毒素B建立了一种基于介孔二氧化硅纳米粒子作为集群酶标记物的化学发光免疫分析方法及其对金黄色葡萄球菌肠毒素B的检测。首先将介孔二氧化硅纳米粒子进行氨基硅烷化处理,然后采用戊二醛标记方法将辣根过氧化物酶和金黄色葡萄球菌肠毒素B二抗同时固定于纳米粒子表面形成MSN-HRP-Ab2复合物。通过优化标记于介孔二氧化硅纳米粒子表面的酶和抗体分子之间的比例来获得更强的化学发光信号,提高了方法的灵敏度。该方法操作简单、成本低、灵敏度高并且成功应用于对水体、食品、以及血清中金黄色葡萄球菌肠毒素B的检测。该方法适用于所有生物样品的分析检测。4.流动注射化学发光免疫分析检测猪肉中的盐酸克伦特罗残留建立了一种快速检测猪肉中盐酸克伦特罗的流动注射-化学发光免疫分析方法。采用过氧化脲作为luminol-CH4N2O·H2O2-HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为增强剂,流动注射化学发光方法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物。该方法灵敏度高、简单可靠、仪器便宜,成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测,结果令人满意,是一种有效快速的食品安全分析检测方法。综上所述,本论文提出了一种基于介孔二氧化硅纳米粒子的新型集群酶标记物及其制备方法。实验证明,与传统的直接将酶分子标记到抗体(或抗原)分子的方法相比,该方法具有操作灵活,过程可控,重复性高,纯化容易,且具有一定的信号放大能力的优点。因此,该标记方法具有极大的应用价值。
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