冠心宁片抗血栓作用及其对MAPKs信号通路的影响

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目的观察冠心宁片抗血栓大鼠模型血栓形成作用和抗血小板聚集的作用,并探讨冠心宁片抗血栓的作用机制,为冠心宁片在临床应用提供实验依据。方法(1)取体重300350g的SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为空白组、模型组、冠心宁片低、中、高剂量组和阳性药组,每组各8只。各组分别给予相对应剂量的药物或蒸馏水后,采用含有丝线的聚乙烯管两端分别插入右侧颈总动脉和左侧颈外静脉,建立大鼠动静脉旁路血栓模型,15分钟后测定各组大鼠血栓重量,并取血测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)以及纤维蛋白原(Fbg)含量。(2)取体重300350g的SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为空白组、模型组、冠心宁片低、中、高剂量组和阳性药组,每组各8只。各组分别给予相对应剂量的药物或蒸馏水后,采用35%的FeCl3诱导建立大鼠颈总动脉血栓模型,测量血栓长度和血栓重量,并取血测定大鼠体内血小板聚集率、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)以及纤维蛋白原(Fbg)含量,ELISA检测大鼠血浆的纤溶系统活性。(3)取SPF级雄性SD大鼠,从腹主静脉取血,采用ADP为诱导剂,用血小板聚集仪测定给予不同浓度的冠心宁片后血小板聚集率;并提取血小板蛋白,测定血小板内p38MAPK、ERK、JNK的蛋白及其磷酸化水平。结果(1)动静脉旁路血栓模型实验结果:不同剂量的冠心宁片能不同程度地降低动静脉旁路血栓模型大鼠的血栓重量,其中,150mg/kg、300mg/kg差异显著(P<0.05,P<0.01),且呈现一定的剂量依赖关系;同时,冠心宁片75mg/kg组、150mg/kg组能明显延长凝血酶原时间(PT)(P<0.01,P<0.05)、显著降低纤维蛋白原含量(P<0.01)。(2)FeCl3致血栓模型实验结果:不同剂量冠心宁片能显著缩短栓长、降低栓重量,明显降低大鼠体内血小板聚集功能(P<0.01,P<0.05),且呈现一定的剂量依赖性;冠心宁片75mg/kg组、150mg/kg组、300mg/kg组均能明显延长凝血酶原时间(PT)(P<0.01);300mg/kg剂量时可延长活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)(P<0.05),明显降低纤维蛋白原(Fbg)含量(P<0.01,P<0.05);另外,冠心宁片不同剂量均能降低纤溶酶原激活物抑制物-1含量(P<0.01),冠心宁片150mg/kg组、300mg/kg组能降低纤溶酶原激活物含量(P<0.01),150mg/kg的冠心宁片对6-酮-前列腺素F1α含量明显升高(P<0.01),各剂量的冠心宁片对血栓素B2和内皮素-1含量无显著性改变(P>0.05)。(3)体外血小板实验结果:冠心宁片在0.1mg/m L浓度时,就有明显的抗血小板聚集作用(P<0.05),并随浓度的增加作用增强,其作用强度呈剂量依赖性;血小板蛋白检测结果,冠心宁片能显著降低血小板MAPKS信号通路中p38MAPK、ERK、JNK相关蛋白磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。结论冠心宁片能有效抑制动静脉旁路血栓模型和FeCl3诱导的颈总动脉血栓模型的血栓形成,具有明显的预防血栓形成作用;同时,冠心宁片可改善血栓模型大鼠血液的高凝状态,并能有效抑制体内外血小板聚集,其作用强度与剂量有关。冠心宁片抗血小板的作用机制可能与影响MAPKS信号通路中p38MAPK、ERK、JNK相关蛋白磷酸化水平有关。
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