革兰氏阴性杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）是一种在多种鱼类宿主中致病的鱼类致病菌,导致鱼类罹患爱德华氏菌病而大量死亡。E.piscicida在鱼体内的定植和致病过程主要依赖于两套分泌系统:Ⅲ型分泌系统（T3SS）和Ⅵ型分泌系统（T6SS）。本课题组利用Mariner家族Himar1转座子,以高致病性的E.piscicida EIB202菌株为为出发菌株,成功构建包含20,668个转座子插入位置确定的饱和突变体文库。基于TS33结构蛋白EseB介导菌体粘附和自聚集导致的沉降表型,本课题对上述转座子插入突变体文库进行体外筛选,一共筛选到47个基因。它们的插入突变株的自聚集表型受到影响,其中包含ETAE₀323。ETAE₀323（命名为InV）,是一个由2,359个氨基酸所组成的侵袭素（Invasin）蛋白。研究发现,InV的插入突变株呈现显著的T3SS缺陷表型。然而,InV的N-端、C-端缺失株以及其回补株并不影响T3SS的表达。T3SS也不影响InV蛋白在胞内和胞外的定位。虽然InV不能调控T3SS表达,但InV突变株在HeLa细胞内显示显著的定植缺陷,同时降低对斑马鱼的毒力。因此推测该蛋白可能参与了 T3SS的动态组装过程,从而影响了 T3SS的体内功能以及体内毒力。由于本课题组发现T3SS影响了脂肪酸的利用。因此本课题利用CRISPR/Cas9技术,以HeLa细胞为模型,探究了 CRISPR/Cas9对该细胞系基因敲除的实验条件和效率。结果发现当病毒溶液占培养基体积比例为50%,感染HeLa细胞12 h,感染效率最高。本课题成功敲除了 SCD1以及DGAT1基因,建立SCD1和DGAT1敲除细胞系。实验发现,SCD1和DGAT1与HeLa细胞中脂代谢和脂滴（Lipid droplets,LDs）的形成密切相关,为实验室后续相关实验打下良好基础。