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木霉是土壤微生物区系的重要组成部分,在土壤中增加其含量能够防治多种植物病害,是应用非常广泛的生物防治菌。分析土壤中木霉的遗传以及功能多样性,能够为开发多功能木霉资源,拓展木霉的应用空间,有效地利用木霉防治植物病原菌,提供理论基础,并可能发现能够应用于多功能菌剂开发的木霉菌株。本实验从山东省临沂、聊城、寿光、章丘四个地区的西红柿、黄瓜大棚,韭菜、白菜菜地,大蒜、大葱种植区采取的120份土壤样品中分离获得木霉244株。通过对峙培养实验发现对棉花棉花立枯丝核菌具有一定拮抗功能的有114株,其中拮抗作用较好的有19株;通过固体培养法检测解磷、解钾、固氮能力发现,244株木霉中有74株具有明显解磷圈,且发现拮抗效果较好的19株解磷圈较大,未发现有明显解钾透明圈的菌株,所有菌株在固氮培养基上无生长现象。对19株拮抗效果较好且解磷圈较大的菌株进行液体培养检测解磷、解钾能力,发现,在液体培养条件下,部分菌株未显示出解磷能力,菌株T13-8(1.792μg/mL)、T23(1.652μg/mL)显示出较高的解磷能力;部分菌株在液体培养下显示出一定的解钾功能,菌株T47-4(20.585μg/mL)显示出较高的解钾能力。通过平板实验检测此19个菌株植酸酶活性发现,能够水解植酸钙的有15株,其中包括高效解磷菌株T13-8、T23,高效解钾菌株T47-4。对以上19个菌株进行了形态学和分子生物学鉴定,发现菌株T8-4、T9-1、T23、T25、T30-5、T31-3、T38-5、T47-4、T35-1为Trichoderma longibrachiatum;菌株T80-2、T38-6、T13-8、T44-1、T57、T62-2、T34、T17为Trichodermaharzianum;菌株T61-2为Trichoderma virens;菌株T18-1为Trichodermacitrinoviride。依据ITS序列进行的系统发育分析结果支持此19个木霉菌株的鉴定结果。研究土壤木霉多样性时,将来自相同地区同种蔬菜作物的土样混合为一份土样,120份共混成13份混合土壤样品,设计木霉ITS区特异保守序列扩增引物,利用PCR-DGGE技术对土壤木霉的多样性进行了分析。发现,临沂地区木霉多样性较高,其次为聊城、寿光、章丘;同一地区,不同蔬菜作物土壤中,木霉种类具有相似性,不同地区之间也有相似种;木霉多样性高的地区土传病害的发生相对较少。为了进一步对PCR-DGGE技术用于土壤木霉多样性分析的可行性提供理论支持,本实验先后通过DGGE技术对19株木霉混合基因组DNA和对应土样基因组DNA的PCR产物、4株单个木霉基因组DNA和相应土样基因组DNA的PCR产物进行了分析,两项研究都证明了DGGE技术应用于土壤木霉多样性分析结果的可靠性。