论文部分内容阅读
卵巢癌仍然是迄今致死率最高的妇科恶性肿瘤,尽管卵巢癌的治疗手段已有很大改进,但总的5年生存率仍维持在45%左右,其中晚期病例仅为30%。大部分患者就诊时已处于临床晚期及初次治疗后复发、耐药是导致卵巢癌患者治疗失败和死亡的主要原因。糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)作为一种丝／苏氨酸蛋白激酶,其生物学作用已远远超过了最初认为的糖代谢调节酶的功能。研究发现,GSK-3与多种肿瘤的发生、发展密切相关,但它在卵巢癌中的生物学意义尚未完全阐明。本研究首先收集临床资料完整的上皮性卵巢癌患者,通过免疫组化检测GSK-3a/β及其活性形式pGSK-3a/β(Tyr279/216)在上皮性卵巢癌组织中的表达,分析其表达与临床病理参数、化疗敏感性及预后的相关性。其次,在建立卵巢癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的基础上,从体内水平观察GSK-3抑制剂——氯化锂对卵巢癌的作用及其对紫杉醇抑癌效果的影响,并检测裸鼠移植瘤组织GSK-3及其下游相关分子表达改变,探讨可能的机制,从而为探索卵巢癌治疗的新策略提供初步的实验基础。第一部分GSK-3在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义目的：检测在上皮性卵巢癌组织GSK-3a/(3和pGSK-3a/β (Tyr279/216)蛋白的表达水平,并分析与临床病理参数、化疗反应及预后的相关性。方法：免疫组化法检测、比较108例卵巢癌和20例卵巢良性肿瘤组织中GSK-3a/p和pGSK-3a/β (Tyr279/216)蛋白的表达水平,并分析卵巢癌GSK-3a/β和pGSK-3a/β (Tyr279/216)蛋白表达与临床病理参数、化疗反应及预后的相关性。结果：1.上皮性卵巢癌组织GSK-3a/β和pGSK-3a/β (Tyr279/216)蛋白的表达水平显著高于良性卵巢肿瘤组织(P<0.001)。2.上皮性卵巢癌组织中GSK-3a/β蛋白高表达与肿瘤临床分期(P=0.001),术后残余灶(P=0.007)及术前血清CA125水平(P<0.001)显著相关。3.上皮性卵巢癌组织中pGSK-3a/β (Tyr279/216)蛋白高表达与肿瘤临床分期(p=0.001)、术后残余灶(P=0.009)及术前血清CA125水平(P=0.005)显著相关。4.化疗不敏感组pGSK-3a/β (Tyr279/216)蛋白表达水平显著高于化疗敏感组(P=0.003).5.单因素生存分析显示,临床分期(P<0.001,P<0.001)、残余灶(P<0.001,P<0.001)、术前血清CA125水平(P<0.001,P<0.001)、化疗方案(P=0.039,P<0.001)及GSK-3a/β(P=0.023, P=0.001). pGSK-3a/β (Tyr279/216)(P=0.018, P=0.007)高表达与患者无瘤生存及总生存相关。多因素分析显示,肿瘤分期(P<0.001)和有无泰素化疗(P=0.041)是患者无瘤生存的独立预后因子,而肿瘤分期(P<0.001),有无泰素化疗(P<0.001)及GSK-3a/β(P=0.027)高表达是患者总生存的独立预后因子。结论：GSK-3可能参与卵巢癌的发生、发展,并可作为卵巢癌预后判断的标志。第二部分GSK-3抑制剂氯化锂单药及联合紫杉醇对卵巢癌细胞作用的体内研究目的：探讨GSK-3抑制剂氯化锂单药及联合紫杉醇对卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的影响。方法：建立卵巢癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成四组,对照组、氯化锂组(Licl组,340mg/kg腹腔注射)、紫杉醇组(Paclitaxel组,20mg/kg腹腔注射)、氯化锂和紫杉醇联合组(Licl+Paclitaxel组),每组各4只。观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率。采用免疫组织化学方法检测GSK-3a/p, pGSK-3a/β(Tyr279/216)及下游分子Caspase-3蛋白的表达。结果：1.各组肿瘤生长情况比较：与对照组想比,氯化锂组,紫杉醇组及两药联合组肿瘤细胞生长受到抑制,其中两药联合组肿瘤生长抑制尤为显著。2.各组抑瘤率的比较：氯化锂组抑瘤率为56.60%,紫杉醇组抑瘤率为68.76%,联合用药组抑瘤率为95.87%,三组比较差异有统计学意义。3.免疫组化检测结果：与对照组及紫杉醇组比较,氯化锂组及两药联合治疗组的pGSK-3a/β(Tyr279/216)表达显著降低；与对照组、氯化锂组、紫杉醇组比较,caspase-3在两药联合组中的表达显著上调。结论：GSK-3抑制剂氯化锂单用及联合紫杉醇均能够显著抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,且氯化锂联合紫杉醇的抑癌效果优于单用紫杉醇组,增加细胞凋亡可能是氯化锂增强紫杉醇抑癌效果的途径之一。