胸腺五肽是一种具有免疫调节功能的小肽分子,由精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸和酪氨酸五种氨基酸残基构成,具有与胸腺生成素II相似的生物活性。由于分子量小、安全、高效的特点,胸腺五肽目前在临床上被广泛应用于肿瘤、乙肝、自身免疫疾病等辅助治疗。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是肠道内天然存在的一种乳酸菌,在动物的胃肠道有着优良的定植能力。研究表明,植物乳杆菌不仅能够分泌杀菌物质,抑制肠道感染,而且能够引起一定的免疫刺激,提高机体的免疫能力。因此,将植物乳杆菌作为基因工程菌表达外源蛋白,已受到国内外研究者们的广泛关注。伴随现代生猪养殖的快速发展,养猪生产中疾病的控制成本越来越高,而利用抗生素等常规药物对疾病的防控作用越来越有限,滥用抗生素不仅对动物健康造成危害,耐药致病菌的出现甚至威胁到人类的生命健康安全。疫病防控困难的主要原因在于猪群遭受各种免疫抑制性因素的影响,而胸腺五肽作为免疫调节剂,在兽医临床领域具有巨大的应用潜力。本研究根据胸腺五肽(TP5)的基因序列,进行植物乳杆菌(Lp1)密码子偏嗜性修饰,并克隆至植物乳杆菌表达载体pSCPSE,由启动子SCP调控外源基因的表达,成功构建表达载体pSCPTP5,并电转化至表达宿主菌植物乳杆菌。通过PCR筛选出阳性重组转化子,并用胸腺五肽ELISA特异性检测试剂盒检测重组植物乳杆菌16 h、20h、24 h、28 h培养上清中目的蛋白的表达含量。用37℃培养12 h的重组植物乳杆菌灌胃刚断奶的SPF级BALB/c小鼠,1次/d,连续灌胃14 d,以灌胃等体积的PBS缓冲液和空载体植物乳杆菌为对阴性照,以腹腔注射TP5标准品的小鼠为阳性对照组。并且以小鼠的胸腺指数、脾脏指数和血清中IL-2的含量为指标检测TP5的生物活性。实验结果:经过双酶切鉴定和测序鉴定,成功构建乳杆菌表达载体pSCPTP5;TP5的ELISA检测结果表明,重组植物乳杆菌在MRS液体培养基中培养24 h目的蛋白表达含量达到最高值;小鼠实验结果表明,灌胃重组植物乳杆菌的小鼠胸腺指数和血清中IL-2的含量显著高于阴性对照组,对脾脏指数无显著影响。结果表明TP5在植物乳杆菌中成功表达,并且具有良好的生物活性,口服重组乳酸菌后,能够显著提高小鼠的免疫力,植物乳杆菌能够定植于小鼠肠道提供长期保护力。本研究成功构建了表达TP5的重组植物乳杆菌,为胸腺五肽和植物乳杆菌在兽医临床领域的应用提供数据支持,为提高猪群免疫力提供理论参考和技术手段。