水牛-猪异种体细胞核移植

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水牛-猪异种体细胞核移植(iSCNT)是指将水牛体细胞注射到猪去核卵子中,通过激活、培养等步骤观察其后续发育情况。异种体细胞核移植对于研究核-质互作、细胞核重编程等机制提供很好的理论依据,利用异种体细胞核移植还可以保护濒临灭绝的珍稀物种,尤其对于卵母细胞不易获得的物种,近年来异种核移植还用来作为人类器官移植的供体,以猪卵子作为受体结合转基因技术生产与人类器官相似的组织,研究人类疾病发病机理及解决方法。本实验采用不同的融合液组分,研究钙离子浓度对本实验条件下猪同种核移植发育的影响;筛选最适合水牛-猪异种核移植胚胎发育的激活条件,此外,探究了培养滴体积与胚胎个数的比例对于其发育的效果,并坚定了水牛-猪异种核移植。本实验的结果如下:1.不同激活电压对水牛-猪异种核移植发育的影响:采用1.0mM的融合激活液,分别采用120v/mm,150v/mm,180v/mm的电场强度,30us、2DC的激活参数。结果发现电场强度对胚胎发育的作用没有统计学上的差异。2.不同融合激活方法对水牛-猪异种核移植发育的影响:采用电融合激活与电融合后化学激活(离子霉素+6--DMAP)的方法,这两种方法对水牛-猪异种体细胞核移植发育没有差异。3.培养滴体积与胚胎个数的比例对其发育的效果:不同重构胚个数放在20ul大小的PZM-3中培养,对异种核移植发育没有影响。4.转基因水牛-猪异种核移植发育的鉴定:采用转染了绿色荧光蛋白的转基因水牛体细胞进行核移植结果发现各个时期的胚胎均可观察到绿色荧光,表明水牛-猪异种核移植可以在体外发育到囊胚。综上得出结论:水牛-猪异种核移植胚胎可以在体外培养发育到囊胚阶段,但是本实验未发现融合激活方法、重构胚个数与培养滴体积比例等对胚胎发育存在统计学差异,且转基因异种核移植胚胎可以发育到囊胚。
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