菌根真菌及其促生细菌提高油松降解柴油的作用

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dong_0622
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本研究在纯培养条件下,对9种外生菌根真菌(Ectomycorrhizal fungi, ECM真菌)灰鹅膏菌Amanita vaginata、乳黄粘盖牛肝菌Suillus lactifluus、绒粘盖牛肝菌Suillus tomentosus、亚黄粘盖牛肝菌Suillus subaureus、灰环粘盖牛肝菌Suillus laricinus、美丽褶孔牛肝菌Phylloporus bellus、褐黄牛肝菌Boletus luridus、黄地勺菌Spathularia flavida和粘盖牛肝菌Suillus bovinus在柴油胁迫下的耐受性进行了筛选;并从石油烃污染地采样分离可降解柴油的菌根真菌促生细菌,对菌根真菌-菌根促生细菌互作关系作了研究,得出以下结论:1外生菌根真菌柴油降解能力的筛选对9种外生菌根真菌的柴油降解能力进行了筛选,在9种ECM真菌中柴油对Suillus tomentosus(ST)的抑菌率均显著低于其余各菌;无论是在液体含油培养基还是葡萄糖含油培养基中,ST均表现出很高的菌丝生物量和柴油降解率;采用GC/MS对ST柴油降解后的产物分析可得,碳数为18-29的正链烷烃被降解的较多,降解产物多为碳数较少的正链烷烃、含多个侧链及侧链较长的烷烃。在含油培养基中添加少量葡萄糖可促进菌丝生物量在柴油胁迫下的积累,显著降低柴油对各菌的抑菌率,提高柴油降解率。2可降解柴油的菌根促生细菌的筛选在石油烃污染地的油松菌根上分离出可在以柴油为唯一碳源的无机盐培养基上生长的细菌18株。将18株细菌与菌根真菌ST在纯培养条件下对峙培养,筛选出对菌根真菌生长具有促进作用的细菌2株及抑制作用较低的细菌3株;通过ST与上述5株细菌在Kottke液体培养基中的共培养,筛选出菌株S826及H2对ST生物量的积累有显著的促进作用。3纯培养条件下单、双接种对柴油降解效率的影响在10 g/L柴油含量的液体培养基中研究了单接种ST、S826、H2及ST-S826与ST-H2双接种的柴油降解率,其降解率分别为36.6%、22.7%、41.4%、63.9%及55.3%,双接种ST-H2柴油降解效率显著高于单接种ST及单接种H2;双接种ST-S826柴油降解效率显著高于单接种ST与单接种S826之和。S826可显著促进菌根真菌ST对柴油的降解效率。4促生细菌S826及H2的菌种鉴定S826在KB培养基上为优势菌株,菌落边缘光滑,呈黄色,有凸起,粘稠而有光泽,表面湿润,KB培养基变成绿色,有恶臭。革兰氏反应阴性,椭圆状。硫化氢试验、甲基红试验、硝酸还原试验、吐温水解试验和明胶液化试验为阴性;吲哚试验,运动性试验、柠檬酸盐试验为阳性。16S rDNA PCR产物长度均为1.5 kb,系统进化树显示,菌株S826与GU186116.1(Pseudomonas putida strain IHBB1369)菌株构成一个分支,16S rRNA序列的同源性达到99%以上。基于生物学特性和16S rDNA序列分析,将S826初步定为恶臭假单胞菌属中的已知种。H2在锰营养琼脂培养基上为优势菌株,菌落呈浅黄色,微微隆起,有光泽,易挑起,边缘齿状。革兰氏反应阳性,菌体杆状,有芽孢。硫化氢试验、吐温水解试验、柠檬酸盐试验为阴性;吲哚试验,运动性试验、甲基红试验、硝酸还原试验和明胶液化试验为阳性。系统进化树显示,菌株H2与EU931557.1( Brevibacillus brevis strain ZFJ-2)菌株构成一个分支,16S rRNA序列的同源性达到99%以上。基于生物学特性和16S rDNA序列分析,将H2初步定为短短芽孢杆菌属中的已知种。5菌根真菌及其促生细菌提高油松降解柴油的作用实验设油松单接种ST(S)、S826(B)及双接种ST与S826(S+B)3个处理,研究不同处理的油松幼苗在0、2、5、10 g/kg干土柴油浓度下的生理反应。结果表明接种处理的油松幼苗(B、S与S+B)生长状况(株高、地径、油松幼苗生物量、根冠比)优于未接种对照;单、双接种处理通过提高油松体内酶活性(SOD)、脯氨酸、叶绿素、可溶性蛋白含量、根系活力及降低植物体内MDA含量减缓了柴油胁迫对植物的毒害作用,有效提高了柴油的降解效率。在柴油初始浓度为2 g/kg干土时,接种处理B、S与S+B的柴油降解效率分别为79.8%、81.5%与82.9%,分别为对照(74.5%)的107.1%、109.4%和111.3%;在柴油浓度为5 g/kg干土时,接种处理的柴油降解效率分别为71.7%、77.1%与81.1%,显著高于对照(69.9%);柴油浓度为10 g/kg干土时,接种处理柴油降解效率为61.7%、66.1%与71.2%,分别比对照(54.2%)高13.8%、22.0%、31.4%。同一柴油浓度下,双接种处理柴油降解效率显著高于单接种,单接种处理S柴油降解效率显著高于单接种处理B。表明双接种处理柴油降解效率优于单接种,单接种菌根真菌处理S优于单接种细菌处理B。
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