【摘 要】
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目的:根腐病是我国药用植物的常见病害,给中药资源产业造成了严重的经济损失。然而,传统农药防治方法带来的农残超标问题降低了中药材的品质,进而制约了中药材产业的高质量发展,开发环境友好型的生物防治手段迫在眉睫。本课题以三七内生菌为原料,旨在筛选能够拮抗根腐病的功能菌株,在此基础上为规模化生产设计和优化微生物菌剂配方并评价其对根腐病的生防效果,以期为中药材根腐病的生物防治提供新的思路与手段。方法:（1）
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目的:根腐病是我国药用植物的常见病害,给中药资源产业造成了严重的经济损失。然而,传统农药防治方法带来的农残超标问题降低了中药材的品质,进而制约了中药材产业的高质量发展,开发环境友好型的生物防治手段迫在眉睫。本课题以三七内生菌为原料,旨在筛选能够拮抗根腐病的功能菌株,在此基础上为规模化生产设计和优化微生物菌剂配方并评价其对根腐病的生防效果,以期为中药材根腐病的生物防治提供新的思路与手段。方法:（1）本研究通过对62株三七内生菌测序和在线比对进行初步鉴定;采用平板对峙试验筛选拮抗根腐病尖孢镰刀菌的内生菌株;运用紫外分光光度法测定拮抗内生菌发酵液产吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA3）的含量;结合形态学及分子生物学的方法进一步鉴定功能菌株;（2）单因素实验优化功能菌株的发酵条件（时间、温度、转速、初始p H）;响应面设计优化菌剂载体、助剂以及其配比方案,并制备出微生物菌剂;（3）通过平板对峙试验、盆栽试验以及定殖能力考察对微生物菌剂的防病促生效果进行评价。结果:（1）共鉴定的62株三七内生菌株,包括17株细菌和45株真菌。平板对峙试验共筛选出3株对根腐病尖孢镰刀菌有抑制作用的内生真菌,且3株内生真菌发酵液均能产IAA和GA3。结合形态学及分子生物学鉴定3株内生菌分别为:Fusarium pseudoanthophilum、Colletotrichum aeschynomenes、Epicoccum thailandicum。（2）单因素优化F.pseudoanthophilum的发酵条件为:60 h,26℃,120r·min-1,p H 6.5;C.aeschynomenes的发酵条件为:72 h,26℃,120 r·min-1,p H6.5;E.thailandicum的发酵条件为:60 h,26℃,120 r·min-1,p H 7.0;复合菌的发酵条件为:72 h,28℃,120 r·min-1,p H 6.5。响应面设计优化结果:F.pseudoanthophilum最佳载体助剂的组合:草炭60.00 g、羧甲基纤维素钠3.50 g和海藻酸钠4.76 g,此时活菌数达到最大,为5.23×10~9cfu·g-1。C.aeschynomenes最佳载体助剂的组合:草炭51.21 g、聚四氟乙烯浓缩分散液2.25 g和海藻酸钠4.16 g,此时活菌数达到最大,为6.33×10~9cfu·g-1。E.thailandicum最佳载体助剂的组合:草炭49.53 g、聚四氟乙烯浓缩分散液1.75 g和海藻酸钠3.64 g,此时活菌数达到最大,为7.30×10~9 cfu·g-1。复合菌剂最佳载体助剂的组合:草炭51.37g、聚四氟乙烯浓缩分散液2.03 g和海藻酸钠4.15 g,此时活菌数达到最大,为4.80×10~9 cfu·g-1。（3）菌剂对峙试验结果表明,4种菌剂质量浓度＞1.00 g·L-1时,对根腐病原菌尖孢镰刀菌具有显著的抑制作用且抑菌率分别为42.3%、52.6%、48.1%、53.6%。盆栽试验结果表明,分别接种F.pseudoanthophilum、C.aeschynomenes、E.thailandicum及复合菌剂28 d后,显著降低了人参幼苗根腐病的发病率（66.99%、64.07%、63.11%和75.73%）和病情指数（61.66%、56.31%、54.89%和68.36%）,且显著促进了人参幼苗的叶长（25.73%、47.09%、25.73%和76.21%）和鲜重（34.48%、47.06%、41.17%和94.12%）。定殖能力考察结果表明,本研究中鉴定的菌株F.pseudoanthophilum、C.aeschynomenes、E.thailandicum分别与人参根部多个OTUs具有密切的亲缘关系,为本研究筛选的菌株在人参根际的定殖提供了依据。结论:本研究在三七内生菌中筛选得到3株具有抗病和植物生长促进潜力的真菌菌株,并对其发酵培养条件（时间、温度、转速、初始p H）进行了优化,进一步通过响应面设计优选载体、助剂及配比,制备出了抗根腐病生防菌剂。该菌剂对人参幼苗具有较好的防病促生效果,值得进一步开发和利用。
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