烟曲霉rho1基因敲除及其功能的初步研究

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摘要:作为临床重要致病真菌之一,烟曲霉可引发侵袭性曲霉病,病死率很高,但其具体致病机制仍不清楚。Rho1是p-1,3-葡聚糖合成酶的调节亚基,调控烟曲霉细胞壁主要成分p-1,3-葡聚糖的合成。由于烟曲霉rho1基因敲除株难以获得,限制了对其功能的深入研究。本论文利用同源重组技术成功获得了烟曲霉AF293的rho1基因敲除株(Δrho1)和rho1基因回补株(rho1,C)。Δrho1在37℃几乎不能生长,这与其他曲霉的rho1基因敲除株明显不同。在30℃或32℃Δrho1可以生长,但其菌丝放射性生长速率远低于野生株,而在25℃其生长速率略高于野生株;Δrho1菌落形态与野生株有明显差异,其边缘比野生株光滑,产孢明显减少,无典型分生孢子头;菌丝顶端变薄,复合体消失,菌丝干重下降。在应激反应方面,Δrho1抗高浓度细胞壁完整性干扰剂和抗氧化应激的能力明显强于野生株,但对渗透压和碱性环境的敏感性与野生株无差别;另外,Δrho1自身ROS产生能力显著高于野生株,这种增高受到细胞壁完整性干扰剂的抑制。rho1基因缺失对烟曲霉粘附肺Ⅱ型上皮细胞并诱发宿主细胞内ROS生成的能力无影响,但显著抑制烟曲霉侵染宿主细胞。在上述性状和生理功能方面,rho1C与野生株无显著差异。初步判断,rho1基因可能在烟曲霉温度适应性、细胞壁完整性、氧化应激以及侵袭宿主等方面发挥重要作用,其具体调控机制亟待深入研究。论文中包含图22幅,表1个,参考文献61篇。
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