许多免疫细胞膜分子存在其可溶型形式，其产生机制可以是通过细胞直接分泌，也可以由一些蛋白酶水解跨膜分子的胞膜外区，使其脱落形成。可溶型膜分子在免疫功能的调节中有重要的作用，而且发现部分可溶型膜分子与一些疾病的发生和发展有关。 LAIR-1／9.1C3最早是在1983年发现的。Burns等在研究NK细胞杀伤机制的过程中，以从人外周血分离的NK细胞免疫小鼠，得到一株单克隆抗体9.1C3，并发现它能够显著抑制NK细胞对K562细胞的杀伤。1997年基因克隆成功，并命名为白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like recepter-1,LAIR-1)。LAIR-1基因位于人染色体19q13.4上的白细胞免疫球蛋样受体复合物(leukocyte Ig-like receptor complex，LRC)内，其分子胞膜外区包含有1个免疫球蛋白样结构域，胞浆区含有2个ITIM基序，可募集SHP-1。LAIR-1广泛表达于多种免疫细胞上，包括NK细胞、B细胞、T细胞、单核细胞、树突状细胞及胸腺细胞等。体外研究表明，LAIR-1被其相应的mAb交联后，可传递强烈的抑制性信号，可抑制包括NK细胞、效应T细胞、B细胞和树突状细胞前体等多种免疫细胞的功能。我室研究证明，9.1C3分子与LAIR-1为同一分子。 我们首先成功构建了LAIR-1分子胞膜外区与人IgFc段融合蛋白的真核重组表达载体载体pIg／3C-9.1C3／LAIR1，表达并纯化了9.1C3／LAIR-1-hIgFc融合蛋白。经鉴定，亲和层析纯化的第四军医大学博士学位论文 中文摘要9．IC3／LAIR＊ 融合蛋保持了较好的免疫反应性。以纯化的9．IC3几AIRl－hlgFC融合蛋白兔疫 BALB汇，采用 B淋巴细胞杂交瘤技术获得2株稳定分泌抗9．IC3／LAIR－l分子胞膜外区InA的杂交瘤细胞系，分别命名为FMUS（4H7和FMUg狸A6卜间接ELISA检测，其腹水InAb效价均达到10”6以上。Ig亚类均为IgGIk卜应用ELISA鉴定mA的特异性表明，两种a与9二C3几AIRq人 及LAIRI／myc融合蛋白有良好的反应性，而且均不能识别PTAINc融合蛋白及人的丙种球蛋白。免疫荧光染色和流式细胞仪检测进一步证实，FMUS和 FMUg能够识别HL－60细胞和人 PBMC上表达的天然 9．IC3几Ath－l分子并且能够识别经基因转染的COS7细胞上表达的9．IC3／LAIR－l分子。ELISA竟争结合试验和生物传感器表位分析结果表明，InAb FMUS、FMUg和 9．IC3识别LAIR－l分子上3个不同的抗原表位，但在空间上有一定的联系。重导向杀伤实验显示，FMUS、FMUg对CD16诱导的MLC效应细胞的杀伤作用产生明显的抑制。 应用识别 LAIR－l不同表位的 InAb 9．IC3和 FMUS，首次建立了检测可溶型LAIR4＊LAIR上）的双单克隆夹心ELISA方法，检测系统灵敏性达到1．sug几，并具有较好的稳定性。 首次证明体内和体外存在天然的sLAIR．l。人PBMC经PMA、PHA、LPS和抗CD3 ab刺激后培养上清中SLAIR上的水平明显升高。其中PMA的作用最显著。丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和3，4DCI以及金属蛋白酶抑制剂EDTA对Jurkat细胞SLAIR－l的产生有较明显的抑制作用，提示膜型分子被水解脱落可能是SLAIR刁形成的主要机制。SLAIR刁双单克隆夹心ELISA方法首次应用于临床标本的检测。在正常人和病人血清中检测到sLAIR－1分子的存在，并发现肾综合征出血热（HFRS）患者和器宫移植患者血清 SLAffi－1的水平明显高于正常人，而且 sLAIR的水平与患者的病情、病程有一定的联系。HFRS 患者和器官移植患者血清sLAIR－1 水平的显著升高提示，SLAIR．l 可能通过阻断膜型LAIR－1分子与其配体上皮细胞瓤附分子（印ithelial cell adhesion molecule，EP－CAM）的结合，降低抑制性受体的负调节作用，而导致效应淋巴细胞的过度活化。博士研究生：薛江柏 导师：金伯泉教授7第四军医大学博士学位论文 中文摘要我们的工作为进一步研究LAIR－l分子的免疫调节功能及其在临床免疫中的应用提供了新的手段。