研究背景：最新癌症调查报告显示：2000-2011年之间,卵巢癌在国内癌症相关死亡率中位于第二位,仅次于乳腺癌,居于生殖系统首位。其中,上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)占所有卵巢癌的90%。目前,上皮性卵巢癌主要的治疗方法是肿瘤细胞减灭术,并辅以铂类为主的化疗,但是其五年生依旧为30%左右。主要是因为目前对于卵巢癌缺乏有效的筛查手段,以至于大部分卵巢患者初诊时已发生远处、多发转移,处于临床晚期。现已证实恶性肿瘤发生远处转移与肿瘤细胞获得侵袭、浸润能力密切相关,因此,阐明上皮性卵巢癌发生、发展过程中的分子改变,以及探讨上皮性卵巢癌细胞获得浸润、转移能力的机制对于上皮性卵巢癌的早期诊断、治疗以及预后有着重要的意义。颗粒蛋白前体(PGRN)是上世纪90年代初发现的一种分泌性生长因子,又称granulin/epithelin precursor(GEP)、proepithelin(PEPI)、PC cells-derived growth factor (PCDGF)或acrogranin,可在不同组织中提取,根据提取组织的不同给予不同命名。颗粒蛋白前体编码大小为68.5 kDa的蛋白,高度糖基化的PGRN蛋白分子量为90-kDa。颗粒蛋白前体具有多种生物学功能,在炎症反应、胚胎发育、损伤修复、神经营养及胰岛素抵抗等方面发挥重要作用。此外,在多种肿瘤中PGRN表达上调,与乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肾上腺癌等肿瘤的增殖、耐药、侵袭转移及肿瘤干细胞特性密切相关,这些生物学过程中可有PI3K/AKT,ERK等信号通路分子的参与。此外,还有研究证实,颗粒蛋白前体可上调GSK3β及cyclinD1,进而参与一系列生物学过程。最近有研究报道颗粒蛋白前体的表达水平与肿瘤的预后密切相关,可以作为预测肿瘤患者预后的关键指标。上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)可以使上皮细胞获得间质细胞的表型,赋予细胞侵袭、转移的能力,在肿瘤的发生、发展过程中起着举足轻重的作用。目前,颗粒蛋白前体对上皮性肿瘤细胞发生上皮间充质转化方面的影响尚未见报道,其影响及其作用机制需要进一步阐述。目的：1.研究颗粒蛋白前体在良性上皮性卵巢肿瘤、上皮性卵巢癌中的表达差异；2.研究颗粒蛋白前体对上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响；3.研究颗粒蛋白前体在上皮性卵巢癌细胞发生上皮间充质转化方面的影响,在蛋白水平检测颗粒蛋白前体过表达前后,上皮间充质转化相关分子的表达变化。4.探讨颗粒蛋白前体促进上皮性卵巢癌发生上皮间充质转化的分子机制。方法：1.利用免疫组织化学的方法检测在良性上皮性卵巢肿瘤组织(34例)与上皮性卵巢癌组织(42例)中,颗粒蛋白前体是否存在表达差异：并且探讨在上皮性卵巢癌中颗粒蛋白前体与Snail的表达是否具有相关性。2.应用慢病毒转染的方法,构建稳定过表达PGRN的上皮性卵巢癌细胞系(A2780、HO8910);应用CCK8试剂盒检测颗粒蛋白前体对细胞增殖能力的影响；应用transwell、室的方法检测颗粒蛋白前体对细胞迁移、侵袭能力的影响。3.利用Western Blot的方法,在蛋白水平检测在上皮性卵巢细胞中过表达颗粒蛋白前体后上皮表型标志物(E-cadherin、ZO-1),间质表型标志物(N-cadherin、Vimentin、Slug、Snail)的表达变化。4.利用Western Blot的方法,在蛋白水平检测在上皮性卵巢细胞中过表达颗粒蛋白前体后Wnt/β-catenin、AKT/mTOR信号通路的活化状态。结果：1.免疫组化结果显示：上皮性卵巢癌组的免疫组化染色评分为3.2941±1.0317,上皮性卵巢癌组的免疫组化评分为8.5500±0.7014,统计学分析发现上皮性卵巢癌中颗粒蛋白前体的表达显著高于良性上皮性卵巢肿瘤p<0.01)；并且在上皮性卵巢癌中,颗粒蛋白前体的表达与Snail的表达呈正相关p<0.001)。2.在上皮性卵巢癌细胞(A2780、H08910)中过表达颗粒蛋白前体后,与对照组相比,细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著增高(p<0.05),说明颗粒蛋白前体增强了上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。3.在上皮性卵巢癌细胞(A2780、H08910)中过表达颗粒蛋白前体后,与对照组相比,上皮表型标志物(E-cadherin、 ZO-1)的表达显著下调,间质表型标志物(N-cadherin、Vimentin)及调节上皮间质转化的转录因子(Snail及Slug)的表达明显上调,说明PGRN促进上皮性卵巢癌细胞由上皮表型向间质表型转化。4.在上皮性卵巢癌细胞(A2780、HO8910)中过表达颗粒蛋白前体后,与对照组相比,β-catenin表达上调；总GSK-3β表达无明显变化,而GSK-3β的失活形式p-GSK-3β(ser9)表达显著下调。这说明PGRN可能通过调节GSK-3β来激活Wnt/β-catenin通路,进而诱导上皮间质转化的发生。5.在上皮性卵巢癌细胞(A2780、HO8910)中过表达颗粒蛋白前体后,与对照组相比,p-mTOR、p-AKT分子表达上调,而mTOR表达无明显差异,这说明PGRN的增加能够激活AKT/mTOR信号通路。结论：1.在上皮性卵巢癌中颗粒蛋白前体表达上调；并且颗粒蛋白前体的表达与Snail的表达呈正相关；2.颗粒蛋白前体能够增强上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力：3.颗粒蛋白前体可以诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间充质转化；4.颗粒蛋白前体可能通过激活Wnt/β-catenin、AKT/mTOR信号通路诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间充质转化。