应用微透析技术研究杨树嫩茎质外体逆境生理及其光合响应

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为了深入了解植物生理生化的变化关系,本文将用于动物生理实验的常规仪器—微透析引入其中,通过前期在鹅掌柴上应用获得的初步微透析成功经验,把其应用于杨树中,建立了透析液中痕量四种内源激素,三种离子和脯氨酸的检测方法,并应用到杨树抗盐胁迫和水分胁迫的生理生化研究中,实现了实时、在线、无损研究杨树嫩茎质外体内各种物质的变化与逆境生理的关系。首先,以杨树嫩茎为对象,建立了可得到纯净的质外体汁液的微透析法,通过直接实验,分别测定了质外体内激素、离子等浓度,又通过间接实验测定了苹果酸脱氢酶的活性,由此可以确定微透析120min后得到的汁液就是纯净的质外体汁液。其次,确定了微透析汁液中四种内源激素、离子和脯氨酸的定量鉴定方法,内源激素采用HPLC进行检测,四种激素检测波长分别为:GA3,203nm; 6-BA,273nm; IAA,214nm; ABA,263nm,保留时间分别为GA3,7.036min; 6-BA, 7.626min; IAA,9.287min; ABA,11.003min,加标回收率都超过93%,四种激素样品样品稳定性和测量精密度高。脯氨酸也采用HPLC进行检测,检测波长:254nm;保留时间为20min,脯氨酸回收率超95%,微透析液中离子采用原子吸收分光光度计(石墨炉法)和外标进行检测,三种离子加标回收率超过95%,测定方法精密度高。最后,将此方法应用到杨树逆境胁迫研究中,采用Li-6400便携式光合仪同时测定了叶绿素荧光和气体交换参数。结果发现,盐胁迫下杨树品种叶片的气体交换参数呈显著差异,高浓度盐胁迫下吴屯杨体内脱落酸(ABA)的积累量为对照的1.3倍,而中荷64体内ABA的积累量为对照的1.8倍;中荷64的PSII原初光能转换效率(Fv/Fm)及电子传递效率(ETR)值显著低于吴屯杨,光系统破坏程度较大;中荷64的抗盐平衡系数明显大于吴屯杨的抗盐平衡系数,说明中荷64激素之间的协调作用下降,生长受胁迫的抑制程度大于吴屯杨,因此吴屯杨耐盐性强于中荷64。干旱胁迫下植物可通过内源激素代谢调控适应干旱环境,干旱胁迫下三种杨树嫩茎质外体GA3、6-BA、3-IAA和ABA等均发生了规律性的动态变化,这说明质外体参与了杨树干旱胁迫的生理生化响应过程。同时,研究杨树质外体内游离脯氨酸在不同程度干旱胁迫下随时间的变化规律。结果表明,对于植物抗逆性的判断,应对其进行分阶段分析,包括初期脯氨酸积累量,中期脯氨酸积累量和维持期脯氨酸积累量,才能全面的表达出脯氨酸积累能力与植物抗逆性的关系,结果表明吴屯杨抗旱性强于中荷64。
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