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多孔菌是指子实层体呈孔状、质地为革质至木质的一类大型担子菌,主要生长在各类木材上。部分多孔菌具有产酶活性、药用活性、降解活性等应用价值。开展多孔菌的采集、分离与功能活性研究,可为多孔菌资源的开发利用,奠定理论和实验基础。本文针对采集的野生多孔菌,开展分离鉴定、培养条件、抗氧化活性、胞外漆酶活性、农药降解作用研究。具体内容如下:1.对两株野生多孔菌子实体进行分离纯化获得纯培养SS菌株和BJ菌株,并对其分类学地位、最适培养条件和液体发酵产物抗氧化活性进行分析。结果表明:结合形态学特征和ITS鉴定,确定SS菌株为多瘤木层孔菌(Phellinus tuberculosus)。菌丝体最适培养条件研究表明,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为黄豆粉,最适C/N比为20/1,最适生长因子为维生素C,最适温度为28℃,最适pH为7.0。发酵液抗氧化活性为0.102 mM(FeSO4);BJ菌株为石榴嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia punicata)。菌丝体最适培养碳源为葡萄糖和麦芽糖,最适氮源为酵母浸粉,最适C/N比为10/1,最适温度为28℃,最适pH为7.0。发酵液总抗氧化活性为0.517 mmol/L(维生素E),菌体的总超氧化物歧化酶活力为770.37 U/g。2.分离获得一株高产漆酶活性的菌株,编号F1635,经过形态学和分子学鉴定为硬毛栓菌(Trametes trogii),利用DEAE-Sepharose、SP-Sepharose和凝胶过滤层析等手段,对发酵液漆酶进行纯化,最终得到电泳纯级的酶蛋白(TsL)。进一步开展酶学特性、降解作用、基因克隆的研究。结果表明:该漆酶是分子量为64.8 kDa的单亚基蛋白。当以ABTS为作用底物时,Tsl的最适pH为2.6,最适温度为50℃,酶促动力学常数Km和Vmax值分别为18.58μM和1.125μmol/min。TsL漆酶对溴百里酚蓝、甲基橙、铬黑T、伊文思蓝等染料具有较强的降解作用,在12 h内降解率均达到78%以上;对农药乙酰甲胺磷和高效氯氰菊酯无明显降解作用。利用简并引物对漆酶的保守区进行克隆,得到长度分别为1246 bp和1264 bp的两条漆酶部分基因的cDNA序列。