论文部分内容阅读
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)所导致的冠心病、心肌梗塞等心血管病是危害人类健康的重大疾患。众多研究表明,AS是一种慢性炎症性疾病,炎症反应参与血管内膜损伤和AS的发生发展,外周血中的单核细胞向动脉壁内膜损伤部位及AS病变部位的迁移、聚集、粘附及活化是AS发生和发展过程中的中心事件,而趋化因子及其受体在这一过程中起重要作用。趋化因子(chemokines)是一类结构和功能相关的小分子肝素结合蛋白超家族成员,在白细胞向炎症及损伤部位的运动、迁移、聚集及随后的活化过程中起着重要作用。趋化因子的生物活性主要是通过与其靶细胞表面相应的趋化因子受体结合而发挥作用的。单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant proteins, MCPs)是趋化细胞因子CC亚家族最具代表性的成员,其对单核细胞具有很强的趋化作用,其受体为趋化因子受体-2(chemokine receptor-2, CCR2),主要表达于单核细胞,T淋巴细胞表面。单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)是CCR2的主要配体,在单核细胞向AS病变部位募集过程中起重要作用。CXC趋化因子受体3(CXC chemokine receptor 3, CXCR3),作为CXCL9(monokine-induced by IFN-γ, Mig), CXCL10 (IFN-γ-induced protein of 10 kDa, IP-10)和CXCL11 (IFN-γ-inducible T cellα-chemoattractant, I-TAC)的共同受体,主要表达于活化的Th1细胞表面,负责调节Th1细胞的迁移。最近的研究表明CXCR3对T细胞向AS病变部位的募集及调节AS病变内Th1细胞的反应具有重要作用。因此,为了更好的阐明CCR2,CXCR3及其相关趋化因子与AS的相关性及其在AS发生和发展过程中所起的重要作用,本实验以高脂高胆固醇饮食饲喂的apoE基因缺失(apolipoprotein E-null mice, apoE-/-)小鼠为AS实验模型,系统地检测了AS发生及发展各个时期CCR2,CXCR3及其相关趋化因子在主动脉中的表达,并初步探讨了体内AS发生早期MCP-1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)中表达的相关分子机制。本实验的结果显示:伴随着高血脂的发生和AS病变的发生和发展,MCP-1、CCR2和CXCR3 mRNA表达水平在AS早期即显著升高,且其上升一直持续至AS发展的中期。IP-10和I-TAC的表达在AS起始阶段也显著上升,并于高脂高胆固醇饮食饲喂第4周后其表达水平达到最高。Mig的表达在早期升高并不明显,但在8周时显著升高,而MCP-2和MCP-3的表达只在AS发展的后期有所升高。免疫组织化学检测的结果显示,apoE-/-小鼠AS起始阶段动脉壁内MCP-1的表达主要来源于VSMCs,随着AS病变的不断发展,在较为严重的病变内,新生内膜的VSMCs和巨噬细胞都成为MCP-1的主要来源。在AS早期(高脂高胆固醇饮食饲喂0和4周)VSMCs表达MCP-1的同时,MCP-1相关转录调节因子活化蛋白-1 (activator protein-1,AP-1)的c-Jun和c-Fos亚基在VSMCs中大量表达并且能够清晰的观察到其在细胞核内的定位,而核转录因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB) p65亚基只在高脂高胆固醇饮食饲喂4周后观察到其在VSMCs细胞核内的定位。此外,本实验还发现,在较为严重AS病变内除了巨噬细胞外,内皮细胞(endothelial cells, ECs)和VSMCs也能够表达CCR2。以上结果为AS发生和发展过程中CCR2,CXCR3及其相关趋化因子的表达提供了重要信息,并且提示中膜VSMCs可能是在AS发生早期MCP-1的主要来源,而AP-1信号通路可能在最初MCP-1在VSMCs的表达中起重要作用。同时本实验中发现的CCR2在AS病变中ECs和VSMCs上的表达也提示,CCR2除了负责募集单核细胞向AS部位聚集外,还可能和AS病变内ECs和VSMCs的增生和迁移有关。