第一部分 LC-MS/MS法同时测定生物样品中乌苯美司和甲氨蝶呤目的:建立一种灵敏、快速、高效、专属的LC-MS/MS方法用于同时测定生物样品中乌苯美司和甲氨蝶呤的浓度。方法:生物样品经乙腈沉淀蛋白后,氮气挥干并复溶,应用Hypersil ODS-C18色谱柱分离,色谱分离的流动相分别为:乙腈-0.1%甲酸水（60:40,v/v）;0.1%甲酸水溶液-甲醇溶液-乙腈溶液（70:10:20,v/v/v）,流速为0.4 mL/min。采用电喷雾离子源（ESI源）多反应监测（MRM）模式,正离子扫描分析m/z 309.2→120.0（乌苯美司）,m/z 455.2→m/z 307.8（甲氨蝶呤）,m/z 370.4→288.1（西洛他唑,内标）。结果:乌苯美司和甲氨蝶呤的线性范围为2.00～2000.00 ng/mL。日内和日间相对标准差均小于15%。结论:建立了灵敏、快速的LC-MS/MS法同时测定生物样品中的乌苯美司和甲氨蝶呤的浓度,并成功应用于药代动力学研究。第二部分 转运体介导白藜芦醇促进乌苯美司吸收的分子药动学机制目的:研究白藜芦醇在大鼠体内和肠道Caco-2细胞中对乌苯美司吸收的影响及其分子药动学机制。方法:采用大鼠体内口服、在体肠灌流和Caco-2细胞摄取实验考察白藜芦醇对乌苯美司肠道吸收的影响。通过real time RT-PCR和Western Blot实验测定转运体表达的变化及信号通路的考察。生物样品中乌苯美司含量应用LC-MS/MS检测。结果:白藜芦醇能够通过上调寡肽转运体1（Pept1）而降低多药耐药蛋白1（Mdr1）和多药耐药相关蛋白2（Mrp2）在基因和蛋白水平的变化增加乌苯美司在大鼠小肠内的吸收。同时,在人肠道Caco-2细胞中研究发现白藜芦醇同样能够增加PEPT1在基因和蛋白水平的表达而降低MDR1和MRP2表达。研究发现,白藜芦醇同样能够降低细胞内胰岛素样因子1受体（IGF-1R）、ERK和AKT磷酸化水平的表达。白藜芦醇通过调节IGF-1R/ERK/AKT信号通路降低MRP2和MDR1的表达。结论:白藜芦醇通过调节PEPT1、MDR1和MRP2转运体的变化同时能够在体内和体外增加乌苯美司的吸收,为临床两药的合用提供了理论根据。第三部分 转运体介导白藜芦醇与甲氨蝶呤药物相互作用的分子药代动力学机制目的:探究白藜芦醇影响甲氨蝶呤药代动力学的分子药理学机制,为临床合理用药提供理论依据和指导。方法:采用大鼠体内口服和静注、体外翻转肠实验、尿排泄、肾切片摄取实验以及 MDR1-MDCK 及 MRP2-MDCK 细胞转运实验、hOAT1-HEK293 及hOAT3-HEK293细胞摄取实验考察白藜芦醇对甲氨蝶呤药代动力学的影响和分子机制。结果:白藜芦醇能够在体内和体外增加甲氨蝶呤的肠道吸收。白藜芦醇能够抑制甲氨蝶呤在MDR1-MDCK和MRP2-MDCK中的外排转运。同样的,静脉给予两药后能够显著降低甲氨蝶呤的肾脏清除率。白藜芦醇同样能够抑制甲氨蝶呤在肾切片和OATs转染细胞中的摄取。同时,白藜芦醇能够降低甲氨蝶呤在OATs中的细胞毒性,甲氨蝶呤引起的肾脏损伤及肌酐尿素氮的水平。但是,白藜芦醇对甲氨蝶呤引起的肠道MDA和MPO水平的升高无明显影响且没有加剧甲氨蝶呤引起的肠损伤的程度。结论:白藜芦醇通过抑制P-gp、MRP2、OAT1和OAT3的功能增加甲氨蝶呤的肠道吸收和减缓甲氨蝶呤的肾脏排泄。在临床合用两药时应考虑适当调整甲氨蝶呤的剂量来起到减毒增效的目的。