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研究背景：替莫哗胺(Temozolomide,TMZ)是第二代烷化剂类药物,因其脂溶性高、易于通过血脑屏障、疗效佳、骨髓抑制作用弱等优势,成为目前临床治疗恶性胶质瘤的一线药物。TMZ本身没有抗肿瘤活性,在生理条件下可自动开环生成活性产物5-(3-甲基三氮烯-1-)咪唑-4-酰胺(MTIC), MTIC进一步水解为5-胺基咪唑-4-甲酰胺(AIC)和具有高度活性的阳离子甲基肼,甲基肼被认为是烷基化的活性片段。但细胞内的DNA修复酶06-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)可以催化DNA分子中鸟嘌呤06位上的甲基转移至自身第145位半胱氨酸残基上,不可逆地将TMZ烷化DNA产生的06-甲基鸟嘌呤上的甲基修复,导致其抗肿瘤活性降低,产生耐药。为克服肿瘤细胞的耐药性,英国的MalcolmStevens教授合成了DNA加合物不被MGMT修复的TMZ的衍生物。研究目的：目前的研究尚未揭示TMZ衍生物逃避MGMT识别与修复的机制,其烷化DNA的位点也不清楚,因此本研究拟在前期工作的基础上,进一步深入了解TMZ衍生物的体内外活性及稳定性,探讨TMZ衍生物与自噬的关系及其与DNA的加合位点,为设计和研发不对DNA修复耐药的DNA损伤药物提供理论依据。研究方法：1,MTT法检测TMZ衍生物对结肠癌和肺癌细胞的半数抑制浓度。2,荧光检测法和免疫印迹法检测TMZ衍生物与细胞自噬的关系。3,建立小鼠肿瘤模型检测TMZ衍生物的体内活性。4,紫外光谱法测定TMZ衍生物不同PH下的稳定性。5, HPLC-MS法检测TMZ与ctDNA,核苷酸片段和dGMP的加合情况。研究结果：1,465对人结肠癌细胞HCT116和人肺癌细胞A549有明显抑制作用；377对HCT116细胞有明显抑制作用,对A549细胞抑制作用较小；253和254对HCT116细胞作用较小,对A549细胞无效。2,TMZ衍生物377和465均不会诱导细胞自噬。3,成功建立scid小鼠肿瘤模型；25mg/kg的465对小鼠肿瘤没有明显抑制作用,此实验有待进一步验证。4,TMZ衍生物377和465在酸性条件下稳定,碱性条件下容易开环。5,未检测出TMZ与ctDNA,核苷酸片段或dGMP的加合物。