9.1C3单克隆抗体轻、重链可变区基因克隆及其单链抗体的构建和表达

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目前研究发现,NK(natural killer cell,NK)细胞在某些自身免疫性疾病以及移植排斥反应,特别是骨髓中移植物抗宿主排斥反应的早期发挥着重要的作用。9.1C3分子是一种主要表达于人外周血单个核细胞表面的糖蛋白。以往研究表明,9.1C3 McAb可以明显阻断NK、LAK(lymphokine activated killer cell,LAK)等杀伤细胞所介导的细胞毒作用,但并不影响效应细胞同靶细胞的结合,提示9.1C3分子在以上这些杀伤细胞介导杀伤过程的后期致死阶段可能发挥着独特的作用。因而9.1C3 McAb不仅在预防移植排斥反应及某些自身免疫性疾病的治疗方面具有潜在的应用价值,而且在研究NK等杀伤细胞的杀伤机理方面也具有十分重要的理论意义。由于亲本抗体的分子大,具有一定的抗原性,因而在临床应用上受到一定限制。单链可变区抗体(single chain variable fragment,ScFv)是一种新型的基因工程抗体。这种新型的ScFv同原亲本抗体性相比,不仅大大降低了抗原性,而且具有良好的抗原结合活性。因此,从分泌9.1C3 McAb的杂交瘤细胞株中构建和表达9.1C3 ScFv具有十分重要的临床和理论意义。 本文运用分子生物学技术,从分泌9.1C3 McAb的杂交瘤细胞株中提取总RNA,经反转录、PCR分别分离了9.1C3 McAb轻链可变区(V_L)基
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