【摘 要】
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目的:1、研究探讨降钙素基因相关肽对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后自噬和凋亡水平的影响。2、研究降钙素基因相关肽对缺氧/复氧H9c2心肌细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路中的相关蛋白的影响方法:在H9c2心肌细胞生长速度最快时,进行缺氧/复氧处理,模拟体内心脏细胞缺血/再灌注损伤。将六孔板中的H9c2心肌细胞随机分为4组,设置3个复孔。按照不同的处理因素分为:空白组;H/R组;CGRP组(向培养
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目的:1、研究探讨降钙素基因相关肽对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后自噬和凋亡水平的影响。2、研究降钙素基因相关肽对缺氧/复氧H9c2心肌细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路中的相关蛋白的影响方法:在H9c2心肌细胞生长速度最快时,进行缺氧/复氧处理,模拟体内心脏细胞缺血/再灌注损伤。将六孔板中的H9c2心肌细胞随机分为4组,设置3个复孔。按照不同的处理因素分为:空白组;H/R组;CGRP组(向培养孔中加入1?10-8mol/L CGRP预处理20min,再H/R处理);CGRP8-37组(于H/R前30min加入1?10-7mol/L CGRP8-37作用10min,加入CGRP作用20min)。利用CCK-8检测细胞存活率;检测细胞上清液中LDH活性;利用TUNEL法检测细胞凋亡;采用JC-1检测线粒体膜电位水平;利用western blot法测定H9c2心肌细胞LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、AKT、P-AKT、mTOR、P-mTOR的表达水平。结果:CCK-8检测:H9c2心肌细胞H/R处理后可降低正常培养细胞的存活率（P<0.01）;而CGRP预处理后可提高H/R细胞存活率（P<0.01）,该作用被CGRP8-37逆转（P<0.01）。ELISA法检测LDH活性:H9c2心肌细胞H/R后,培养液中LDH活性比空白组高（P<0.01）,CGRP可降低H/R心肌细胞培养液中LDH活性（P<0.01）,该作用被CGRP8-37拮抗（P<0.01）。TUNEL法检测:H/R处理后心肌细胞的凋亡率比正常培养细胞的凋亡率高（P<0.01）,CGRP可降低H/R心肌细胞的凋亡率（P<0.01）该作用被CGRP8-37拮抗（P<0.01）。荧光探针JC-1检测:H/R可降低正常培养细胞的线粒体膜电位水平（均P<0.01）。CGRP处理后可提高H/R后H9c2心肌细胞的线粒体膜电位（均P<0.01）;CGRP抑制剂CGRP8-37可逆转CGRP对H9c2心肌细胞的作用（P<0.01）。Western Blot检测:H/R可提高正常培养心肌细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P<0.01）,P-AKT/AKT比值、P-mTOR/mTOR值降低（P<0.01）,与H/R组比较,CGRP组Beclin-1表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.01）,P-AKT/AKT比值、P-mTOR/mTOR值升高（P<0.01）,CGRP8-37可逆转CGRP的作用（P<0.01）。结论:CGRP可能通过激活AKT/mTOR通路抑制过度自噬,提高细胞生存率,减轻细胞凋亡,保护H/R心肌细胞。
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