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猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus）属于α冠状病毒,可引起仔猪产生急性的、高度接触性肠道传染病。PEDV的感染会导致宿主细胞mRNA与miRNA表达水平动态的变化,并与病毒形成复杂的作用网络。全面的分析差异表达宿主因子对PEDV复制的调控,有助于完整地掌握病毒感染后细胞组分、生物学功能、信号通路的变化规律,了解PEDV的致病机制,筛选影响病毒入侵、调控病毒复制的宿主因子。Vero E6细胞是PEDV分离、传代和进行实验研究的主要细胞。本研究通过对感染PEDV弱毒株CV777与强毒株LNct2的Vero E6细胞进行RNA高通量测序,分析细胞内mRNA及miRNA的差异表达情况。与对照组相比,CV777感染组筛选出33个差异表达基因,LNct2感染组筛选出1854个差异表达基因,两组共有的差异基因为16个。miRNA测序结果显示CV777感染组共产生23个差异表达miRNA,LNct2感染组共产生70个差异表达miRNA,两组共有的差异表达miRNA为10个。对差异表达的宿主因子进行生物信息学分析,结果显示差异表达因子主要富集在调控细胞内信号转导、细胞代谢、细胞凋亡等通路上,干扰素刺激因子APOBEC3、OASL、MX2、IFITM3等均下调表达,提示PEDV通过拮抗IFN抗病毒分子的表达从而逃逸宿主先天性免疫反应。另外,RNA-seq测序结果显示PEDV感染激活MAPK等信号通路。进一步研究发现PEDV感染后上调表达的宿主因子Abl2可以影响病毒的复制。Abl2是一种非受体酪氨酸激酶,调控细胞多种生命进程。通过western blot、测定TCID50试验发现,沉默Abl2后病毒N蛋白的表达、病毒滴度均显著下降。应用Abl2特异性抑制剂imatinb、GNF2、GNF5均可以显著抑制PEDV复制,并随着抑制剂工作浓度的增加抗病毒效果越明显,提示Abl2参与了病毒的复制过程。通过在病毒感染的不同时间加入Abl2特异性抑制剂,证明Abl2影响PEDV复制主要发生于病毒入侵阶段,但不影响病毒的吸附过程。同时,加入Abl2抑制剂后通过间接免疫荧光观察病毒诱导细胞形成的合胞体明显变小,合胞体数量也减少。外源性表达PEDV S蛋白后加入Abl2抑制剂实验进一步确定了Abl2影响PEDV S蛋白介导的细胞间合胞体的形成从而促进病毒的复制。另外,Abl2酶抑制剂imatinb、GNF2、GNF5对猪肠道冠状病毒具备广谱性抑制作用,加入抑制剂后可以显著抑制TGEV、PDCoV在ST细胞中的感染,并同样抑制病毒的入侵及细胞合胞体的形成。为研究PEDV感染过程中Vero E6细胞差异表达的miRNA对病毒的调控作用,应用miRNA mimic/inhibitor实验筛选影响PEDV复制的miRNA。结果发现miR-486-5p、miR-339-5p、miR-1271-5p可以显著抑制病毒复制,而miR-33a可以促进病毒复制。应用RT-qPCR、双荧光素酶报告系统等手段筛选出miR-486-5p在PEDV感染过程中起调控作用的靶基因是SRSF3,上调表达SRSF3促进病毒的感染而沉默SRSF3抑制病毒的复制。另外SRSF3并不是通过与PEDV N蛋白发生相互作用而影响病毒复制,其具体机制有待进一步探索。本研究构建了PEDV感染Vero E6细胞mRNA/miRNA表达谱,并发现Abl2在PEDV入侵阶段发挥调控作用,同时筛选出影响PEDV复制的miRNA,对挖掘新的PEDV药物靶点进而提供新的抗病毒策略具有重要的借鉴意义。