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目的观察吗啡(morphine,M)、曲马多(tramadol,T)预先给药对去甲肾上腺素(norepinepherine,NE)诱导的心肌细胞肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor, TNF-α)、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达的影响,探讨吗啡、曲马多痛觉干预在细胞水平的心肌保护作用机制。方法第一部分实验选用1~3天龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立体外培养新生大鼠心肌细胞模型,采用免疫细胞化学(IC)染色方法对心肌细胞进行鉴定。第二部分实验选用40孔培养第4~5天呈亚融合状态下细胞随机分为10组,每组4孔:对照组、3h组、6h组、12h组、24h组、NE1组(10-6mol·L-1NE )、NE2组(10-7mol·L-1 NE )、NE3组(10-8 mol·L-1 NE)、M组、T组。采用酶免疫试验(EIA)技术、反转录PCR(RT-PCR)技术、免疫细胞化学(IC)技术观察NE诱导及吗啡、曲马多预先给药后心肌细胞内TNF-α表达的变化。第三部分实验选用32孔培养第4~5天呈亚融合状态下细胞随机分为8组,每组4孔:对照组、NE1组(10-6mol·L-1NE )、NE2组(10-7mol·L-1 NE )、NE3组(10-8 mol·L-1 NE)、M组、T组、Ph组、Es组。分别采用流式细胞(FCM)技术、免疫细胞化学(IC)技术观察NE诱导后及吗啡、曲马多、酚妥拉明、艾司洛尔预先给药后心肌细胞内NF-κB表达的变化。结果(1)培养细胞上清液中加入NE进行诱导,3h组、6h组、12h组、24h组、10-6 mol·L-1组、10-7 mol·L-1组、10-8 mol·L-1NE组(24小时)均可诱导心肌细胞TNF-α的蛋白和核酸表达水平较对照组显著升高(p<0.05),在10-8 mol·L-1 NE、24h组达高峰。(2)培养细胞上清液中加入NE进行诱导,10-6 mol·L-1、10-7 mol·L-1、10-8 mol·L-1NE(24小时)均可诱导心肌细胞NF-κB的激活水平较对照组显著升高(p<0.05),在10-8 mol·L-1 NE组达高峰。(3)吗啡和曲马多组TNF-α的蛋白和核酸表达水平明显低于10-8 mol·L-1 NE组(p<0.05),吗啡和曲马多组二者间比较差异无显著性(p>0.05)。(4)吗啡组、曲马多组、酚妥拉明组和艾司洛尔组NF-κB的激活水平低于10-8 mol·L-1 NE组(p<0.05),吗啡组、曲马多组、酚妥拉明组、艾司洛尔组二者间比较差异无显著性(p>0.05)。结论( 1)培养细胞上清中加入NE可诱导体外培养新生大鼠心肌细胞TNF-α、NF-κB表达、激活水平增高。