【摘 要】
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目的:1、采用多因素方法建立早期DN气阴两虚夹瘀证大鼠模型,观察模型大鼠肾组织中Notch信号通路的Jagged1、Notch1、Hes1及Hey1蛋白表达,探讨早期DN气阴两虚夹瘀证发病机制与
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目的:1、采用多因素方法建立早期DN气阴两虚夹瘀证大鼠模型,观察模型大鼠肾组织中Notch信号通路的Jagged1、Notch1、Hes1及Hey1蛋白表达,探讨早期DN气阴两虚夹瘀证发病机制与Notch信号通路之间的关联性。2、观察益气养阴活血中药丹蛭降糖胶囊对早期DN气阴两虚夹瘀证大鼠模型肾组织中Notch信号通路的Jagged1、Notch1、Hes1及Hey1蛋白表达的影响,探讨中医药防治早期DN气阴两虚夹瘀证的机制。方法:采用雄性SD大鼠为实验研究动物。适应性饲养1周后,随机分出正常组(K)和模型组(M)。模型组大鼠均予以左侧肾脏切除,1周后予以高糖高脂(10%猪油、2.5%胆固醇、20%蔗糖)饲料喂养4周后,禁食不进水12 h,按照30 mg/kg体重腹腔注射STZ(以PH4.2的0.1 mmol/L枸橼酸缓冲液配成2%浓度),72 h后尾静脉采血测量血糖值≥16.7 mmol/L,且尿量和饮食、饮水量明显增多,为造模成功,2周后经尿白蛋白检测后确认为早期DN模型。正常组予适量的生理盐水灌胃,模型组均以中药枳壳、附子、青皮煎剂灌胃以及低温调控诱导气阴两虚夹瘀证大鼠模型,造模成功后按数字随机法分组,模型组(M)、西药组(X)、中药高、中、低剂量组(G、Z、D)。各组治疗8周后,留取血、尿标本,分别测量各组大鼠的血糖(Glu)、血肌酐(Scr)、24小时尿微量白蛋白、肾重/体重,并取肾组织,制作病理切片,进行苏木素伊红(HE)染色,观察肾组织的病理变化,用免疫组化检测Notch/Jagged1、Notch1、Hes1及Hey1蛋白表达、实时荧光定量PCR定量检测Notch/Hes1-m RNA。结果:(1)血糖、血肌酐变化趋势:与正常组比较,模型组血糖值、血肌酐值升高(P<0.05);用药8周后,与模型组相比,中药各剂量组血糖值、血肌酐值均下降(P<0.05)。(2)24小时尿微量白蛋白变化趋势:与K组比较,M组明显上升(P<0.05);与模型组比较,X组、中药各剂量组均下降(P<0.05),与X组比较,Z组、D组均升高(P<0.05);与G组组比较,Z组、D组均升高(P<0.05);(3)肾脏/体重值:与K组比较,M组大鼠肾重比显著升高(P<0.05);与M组比较,X组、中药各剂量组均降低(P<0.05);与X组比较,中药各剂量组均下降(P<0.05);与Z组比较,G组有所下降(P<0.05),D组有所升高(P<0.05)。(4)HE染色的病理观察模型组大鼠出现肾小球硬化、萎缩,系膜基质增多、系膜出现增厚增宽并可见结节样增生等改变;中药高、中剂量组对上述病理改变有积极改善。(5)Notch/Jagged1、Notch1、Hes1及Hey1蛋白表达情况:Jagged1:与K组相比,M组无统计学意义(P>0.05);但M组的平均值较K组有升高趋势,G组的平均值较M组有所降低趋势。Notch1:与K组比较,M组无统计学意义(P>0.05);与M组比较,各治疗组无统计学意义(P>0.05)。但M组的平均值较K组有升高趋势,各治疗组的平均值较M组有所降低趋势。Hes1:与K组比较,M组的平均值明显增高(P<0.05);与M组比较,各治疗组明显降低(P<0.05),但各治疗组间比较无差异。Hey1:与K组比较,M组无统计学意义(P>0.05);与M组比较,X组的平均值明显增高(P<0.05),其它各治疗组无统计学意义(P>0.05)。(6)Notch/Hes1-m RNA表达测定:与K组比较,M模型组明显增高(P<0.05);与M组比较,各治疗组明显降低(P<0.05),但各治疗组间比较无差异。结论:益气养阴活血中药丹蛭降糖胶囊对早期DN气阴两虚夹瘀证大鼠模型具有降糖作用,降低血肌酐、尿微量白蛋白,同时通过降低大鼠肾组织Hes1蛋白及m RNA的表达量,发挥对肾功能的保护作用,减少蛋白尿形成,延缓DN的发展。
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