目的1.体外分离培养多囊卵巢综合征(PCOS)和非PCOS患者黄素化颗粒细胞并用卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定;2.探讨二甲双胍(Met)对PCOS黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)及p-ser307-IRS-1的信使核糖核酸(m RNA)及蛋白表达水平的影响。方法分离纯化体外培养的PCOS和非PCOS组黄素化颗粒细胞用FSHR免疫细胞化学染色鉴定;添加Met处理培养为实验组,添加类胰岛素生长因子-1(IGF-1)为阳性对照组,15%FBS-M199培养基中加入与Met等量PBS培养为阴性对照组;通过RT-PCR和real-time PCR检测分析IRS-1m RNA的表达,细胞免疫荧光化学方法定性和Western-Blot定量检测分析IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达。SPSS17.0统计软件处理如果p<0.05表示差异有显著意义。结果1.FSHR蛋白免疫细胞化学染色是鉴定颗粒细胞的特异性标记物,FSHR阳性染色定位于细胞胞浆和细胞膜,呈绿色荧光,细胞核呈蓝色荧光,镜下可见FSHR的阳性率大于95%;2.RT-PCR法扩增出IRS-1的片段大小为134bp,real-time PCR分析结果显示添加Met对PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 m RNA表达显著下调,与阳性及阴性对照组比较差异有统计学意义(p<0.05);3.细胞免疫荧光化学检测IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白阳性表达定位在颗粒细胞细胞质;4.Western-blot检测Met作用24h后卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达下调,差异有统计学意义(p<0.05),灰度值分析结果显示PCOS组卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达高于非PCOS组,添加Met组作用24h后PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达较非PCOS组显著性下降(p<0.05)。结论1、FSHR蛋白免疫荧光化学染色阳性率大于95%,卵泡液分离黄素化颗粒细胞培养的纯度达到95%以上2、PCOS患者卵巢颗粒细胞IRS-1及其磷酸化表达上升3、Met降低PCOS患者卵巢颗粒细胞IRS-1及其磷酸化的表达