具有死亡功能区的Fas相关蛋白(Fas-associating protein with a novel death domain,FADD),最早是作为凋亡过程中的衔接蛋白被人们所熟知。随着研究的进一步深入,发现FADD也参与了多种非凋亡有关的细胞进程。南京大学华子春课题组围绕FADD的新生物学功能取得了多项研究进展。在此基础上,本文以构建6种过表达载体为起点,以果蝇作为模式动物,采用标准的显微注射技术,构建转基因果蝇模型,并进一步研究磷酸化FADD的非凋亡功能。首先,构建老鼠全长的FADD (mFADD)、持续磷酸化mFADD (S191D)、持续非磷酸化mFADD(S191A)、C末端敲除的mFADD、BG4、及选择标记c-myc(对照)6种过表达载体,我们根据鼠FADD基因序列并利用重叠延伸PCR定点突变方法,获得磷酸化mFADD、非磷酸化mFADD、C末端敲除的mFADD及序列正确的BG4。将各形式的FADD片段通过PCR扩增后,连接到载体pUASTattB中。其次,采取标准的显微注射技术,注射24872(2号染色体定点突变)果蝇胚胎,以橘黄眼或红眼为转基因的标记表现型,获得过表达mFADD、C末端敲除、pFADD、npFADD、BG4、c-myc的转基因果蝇。第三,制备dFADD基因敲除果蝇,利用CRISPR/Cas9技术,采取标准的显微注射技术,注射到果蝇54591(持续表达Cas9的转基因果蝇)胚胎中,待幼虫羽化后逐个逐代进行杂交鉴定。第四,分析上述六种过表达转基因果蝇的遗传性状：(1)转基因果蝇遗传表型分析：对眼睛及翅膀表型分析,结果显示部分FADD-D果蝇翅膀出现卷曲现象,但对果蝇眼睛并没有明显的影响。(2)对细胞周期的影响：检测细胞周期相关蛋白cyclinE mRNA的表达情况,观察是否发生表达紊乱；(3)天然免疫中的作用分析：检测参与Imd途径的Dredd蛋白mRNA的表达水平；(4)糖代谢相关酶的表达变化：检测果蝇中糖代谢相关酶G6pc、Pepck mRNA的表达变化；(5)攀爬、寿命分析：统计结果表明,FADD-D果蝇攀爬能力下降、寿命变短,并且各转基因果蝇攀爬能力及寿命较对照组都有明显下降趋势；最后,获得在dFADD knock down(RNAi)的基础上,过表达FADD的转基因果蝇：分别将dFADD knock down的果蝇、各种过表达的转基因果蝇与含双平衡子工具果蝇杂交。根据平衡子的表型特征,挑选子一代果蝇,将子一代杂交得到子二代果蝇,从而获得我们预期的转基因果蝇。综合以上研究结果,我们认为FADD磷酸化对果蝇的寿命及运动能力产生影响。