阿维拉霉素生产菌推理选育及其发酵条件的初步研究

被引量 : 0次 | 上传用户:chunya88
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
阿维拉霉素是一种混合型的低聚糖,作为饲料添加剂应用的抗生素。它通过维持动物肠道内细菌的正常平衡,减少动物正常营养的消耗,从而达到促生长目的。本论文对一株绿色产色链霉菌发酵生产阿维拉霉素进行了初步研究,主要包括菌种鉴定,高产菌株的多重诱变及推理选育,阿维拉霉素发酵培养基及条件优化,以及扩大培养等内容。采用细菌形态学、电镜透射与扫描图象分析,菌株A-05的菌丝较为粗壮,不产生横隔膜,孢子短,卵圆形,表面为长刺所覆盖,孢子丝单分枝,有许多松敞或紧密的左旋螺旋;菌株细胞壁组分含有L,L—二氨基庚二酸,无特征性糖(胞壁I型,糖型C),属于链霉菌属;生理生化特征与与绿色产色链霉菌相似;16S rDNA分析表明此菌株与绿色产色链霉菌同源性100%,因此初步判定菌株A-05为链霉菌属,绿色产色链霉种。该菌株与绿色产色链霉菌在利用棉子糖和纤维素方面存在差异,因此判定该菌株为一株绿色产色链霉菌的变种,并暂命名Streptomyces virichromodenes Var.LH。通过对菌种A-05的代谢产物阿维拉霉素进行定性和定量分析,建立了阿维拉霉素萃取的工艺条件、检测发酵液中阿维拉霉素含量的微生物效价测定法和高效液相色谱法。采用二剂量法回归得到效价计算公式:LogY=0.6592R2+0.5717。高效液相色谱法和质谱法分析验证了发酵产物为阿维拉霉素,其中以阿维拉霉素A为主要成分,分子量为1401,保留时间为35.46min。菌株经3000Gy的Co60射线诱变、80U/mL阿维拉霉素抗性平板中抗性突变株的筛选、100U/mL链霉素抗性平板中抗性突变株的筛选、0.15%2-脱氧-D-葡萄糖抗性平板中抗性突变株筛选、0.35%α-氨基丁酸抗性平板中抗性突变株的筛选,得到一株阿维拉霉素高产菌株H-15,产量从原来的9.8U/mL提高到68.7U/mL,提高了近580%。通过对碳源、氮源的单因素考察确定了较优碳源为可溶性淀粉,木糖次之,而乳糖产量相对较低;较优氮源为豆粕粉,大豆蛋白胨次之,无机氮硝酸钾则较低。并利用响应面法对发酵培养基的组成进行了优化,得到较适培养基为可溶性淀粉20.12g/L,D-木糖为7.81g/L,豆粕粉为25.23g/L,大豆蛋白胨为5.06g/L,MnCl2 0.60g/L,MgSO4.7H2O 0.60g/L,pH 7.2~7.4。培养基优化后阿维拉霉素效价比文献报道的初始培养基提高了65%。对摇瓶条件进行了单因素优化试验。斜面菌种保藏时间对种子活力影响不大,低温保藏具有较好的稳定性,保藏1周的斜面生物效价达到最高,斜面相对效价为104%,当保藏三周后,斜面生物效价只有72%;一级摇瓶种龄24h,接种量5%,装液量100mL/500mL三角瓶,pH7.2~7.4,发酵时间48h,阿维拉霉素有较高效价;发酵过程中在38h和46h两次补加1%葡萄糖时,产量比不补料提高了16%左右;乙酸钠在16h补加0.1%时,产量比不补料提高了29%;20h补加0.5%的豆油,产量比不补料提高125%。在5L玻璃罐试验结果表明,菌株发酵需氧量不高,通过转速和溶氧的联合控制,在发酵液中氧分压(pO2)20%溶氧浓度下菌株阿维拉霉素产量达到160U/mL。放大到50L不锈钢罐,阿维拉霉素产量为164U/mL,豆油和葡萄糖补料,效价分别比分批发酵提高了18%和8%。
其他文献
在新中国成立后一直到改革开放前的20多年中,为了集中全国的力量进行经济建设,我国农村为城市的发展做出了巨大贡献,也付出了巨大的代价,造成了我国农村公共服务供给严重不足
新疆棉花连作现象普遍,连作障碍严重,通过轮作调节农田生态环境、缓解棉花连作障碍对实现新疆棉花生产的可持续发展具有重要意义。基于棉花长期连作30年棉田土壤,设置连作棉
在两次计量确认间隔期内,借鉴测量过程控制思想,提出一种自动测试系统量值稳定性监控方法,用以保障其性能指标。在核查数据为小样本情况下,针对传统控制图方法在测量过程控制中容
近年来,我国的社区服务得到了长足的发展,并且取得了很多成功的经验,但是与世界上成熟的社区服务相比还有很多的不足之处。随着电子政务和信息化浪潮的扑面而来,“数字城市”
利用利益衡量的法律方法来解决生育权中的纠纷是一种有益的尝试。为了达到这一目的,首先要厘清生育权纠纷中存在什么样的利益主体,然后具体分析国家利益与生育权之间、生育权
将断裂带分作高渗带和低渗带,利用逾渗数学模型模拟不同渗透性断裂带油气运移特征。不管将断裂考虑为低渗带还是高渗带,断裂都对油气运移有阻挡、汇聚作用。凡是在断裂投影范
社会保障是市场经济条件下保证社会公正的利益均衡和协调机制,是构建和谐社会的重要内容,与人民群众的切身利益相关。而建立基本养老保险个人账户,是我国社会统筹与个人账户
近年来,农村城镇化建设在全国蓬勃开展,农村城镇化是一个综合的社会经济发展和演变过程,是促进农村经济发展的必然选择,是协调城乡区域发展的重要举措,同时也是对城乡分割二
本文采用跨文化比较的方法,对中、美、英三种电影简介文本做了体裁材分析,旨在发现文化对这种文本的影响,从而更好的理解和运用这种体裁。本研究从一个假设―――在实现同样
在知识经济时代,人力资源作为企业的首要资源,在企业中的地位越来越重要,它关系到企业的未来发展、企业战略目标的实现。其中管理人员的能力发挥发展直接关系到企业的兴衰和