不同转移潜能食管癌细胞株的建立及差异蛋白鉴定

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liqi1987712
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目的:建立具有不同转移潜能的高侵袭能力食管癌细胞株,通过体外检测、裸鼠体内成瘤实验,分析其细胞生物学特性;鉴定两组不同转移潜能食管癌细胞株转移相关的差异蛋白质。为今后探索食管癌转移机制提供理想的模型,进一步探讨食管癌的转移机制。方法:(1)利用Transwell侵袭小室从食管癌Eca-109细胞株中筛选出高侵袭能力食管癌细胞株亚系;HE染色比较细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力的变化,划痕实验检测细胞的移动能力,再通过裸鼠体内成瘤模型,观察成瘤率、成瘤时间、肿瘤生长情况及对裸鼠机体情况的影响检测两组细胞株不同转移潜能。(2)用180标记定量蛋白质组方法鉴定食管癌Eca-109母系及亚希高转移细胞株的差异蛋白。(3)免疫组化法验证RKIP蛋白的表达在食管癌转移中的作用。结果:(1)利用Transwell侵袭小室从食管癌Eca-109细胞株中筛选出高侵袭能力食管癌细胞株亚系,命名为Eca-109T4;体外实验:HE染色示两个细胞系细胞形态没有明显差异,MTT法检测显示亚系Eca-109T4增殖能力强,划痕实验示亚系Eca-109T4移动能力明显增强;体内实验:注射Eca-109原代和Eca-109T4细胞的两组裸鼠成瘤率均为100%,Eca-109T4组成瘤时间早、瘤体成长快并有更强的转移能力。(2)定量蛋白质组方法检测出7个差异蛋白质的存在,其中HSP90AB1、RKIP、Annexin A1蛋白可能与食管癌的恶性生物学行为相关。(3)免疫组化结果显示RKIP蛋白表达在肿瘤中较正常食管组织明显下调。两组肿瘤细胞表达RKIP差异有显著性意义(P<0.05)。结论:(1)在遗传背景相似的前提下,建立Eca-109T0和Eca-109T4不同转移潜能高侵袭能力食管癌细胞株,为研究人食管癌转移机制提供了有力工具。(2)鉴定某些差异蛋白质有望成为潜在的诊断食管癌转移相关分子标志物。
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