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延长百合花朵的寿命已成为近20年来专家们研究的主要课题之一,研究表明,抑制乙烯的生物合成是延缓切花衰老的有效途径。 本文以东方百合“西伯利亚”、“索邦”和铁炮百合为研究材料,通过外植体再生和抗生素筛选实验确定了百合遗传转化受体系统,利用GUS基因和ACC合酶反义基因对“西伯利亚”进行了根癌农杆菌介导的遗传转化,从而建立了高效稳定的百合遗传转化体系。 百合鳞片在诱导愈伤组织、不定芽及生根的能力上有一定的差异,“西伯利亚”的再生能力最强,其次为“索邦”、铁炮百合。在含有0.2、0.5mg/L 6-BA和0.5~2.0mg/L2.4-D或0.1、0.2mg/L NAA的MS培养基中,3个品种都能高效再生。抗生素筛选实验结果表明,50~100mg/L卡那霉素或7.5~10mg/L潮霉素浓度范围对百合愈伤组织和鳞片效果较理想。 在建立“西伯利亚”农杆菌介导的遗传转化体系中,农杆菌侵染愈伤组织外植体转化效率较高;乙酰丁香酮(AS)的添加能大大提高根癌农杆菌转化百合的效率;LBA4404菌株的侵染效果好于GV3101菌株。另外,预培养时间、农杆菌浓度、侵染时间、及共培养时间均对转化效率有一定的影响,转化材料在OD600为0.4的菌液中侵染15min,共培养2~3天转化效率最高。筛选后获得的抗性植株经PCR检测和GUS组织化学染色证实外源基因已经整合到基因组DNA中并获得表达,转化频率为5%~8%。 利用ACC合酶反义基因对“西伯利亚”遗传转化获得了9株转化植株,经PCR检测其中2株呈阳性,初步证实了外源基因已整合进百合基因组中,从而证实了所建立的转化系统的可应用性。