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水稻细菌性基腐病(Dickeya zeae)是近年来我国部分省(区)水稻上发生危害较为严重的病害之一。2008年该病在湖北首次发现,并在局部地区少数田块造成毁灭性危害。建立病害快速诊断检测体系,对于控制本病的扩散蔓延和有效防治具有重要意义。在植物病原细菌的检测中,传统的细菌检测不同方法,通常较为费时,且灵敏度低,在实际应用中均有一定的局限性。以PCR为基础的分子检测技术使植物病原细菌的检测更快速、灵敏和可靠。继常规PCR之后,实时荧光PCR技术应用使其检测效果更快捷、更精确。SYBR Green法实验设计简单,不需要设计探针,通用性好,成本低且能够进行溶解曲线分析检验扩增反应的特异性,与常规PCR相比,灵敏度高、操作方便、无污染,避免了普通PCR后续操作污染的问题。本研究在对水稻细菌性基腐病菌相关特性、电镜形态特征观察及不同水稻品种抗感病性人工接种鉴定的基础上,比较评价了常规PCR和实时荧光PCR方法对不同来源菌株和带菌种子及土壤检测的灵敏性,并通过盆栽试验方法,观察了水稻细菌性基腐病的自然传播途径。研究取得了如下主要结果：1.对从湖北枝江水稻品种分离得出的细菌性基腐病菌菌株,在前期病原学研究基础上,对病菌的革兰氏染色反应和形态特征及致病特性进一步进行了观察试验,结果显示,病菌革兰氏染色为阴性反应,菌体在电子显微镜下呈短杆状,具周生鞭毛,菌体大小为(0.5—0.7)um×(1.0—2.5)um。培养菌株悬液,通过注射接种、伤根接种水稻植株可表现典型症状,菌液浸种可使幼芽变褐,降低出苗率。根据对25个中稻品种,人工接种抗感病性鉴定显示：不同水稻品种对基腐病的抗感病性存在明显差异,在供试的品种中,其中有6个品种表现为中抗,有9个品种表现为中感,有9个品种表现为高感,水稻品种抗病性的鉴定对生产实际具有重要的指导价值。2.根据水稻细菌性基腐病菌菌株的16S-23S细菌核糖体DNA ITS区域的特异区间,设计一对检测基腐病菌的特异性引物X1:GAGTAGAAGTGCCTGCGTG和X2:AGGTTAGCGTTGACCGTGC,经特异性和灵敏度实验检测,发现供试的8种菌株中只有水稻细菌性基腐病菌株能够被检测出来,在一定的范围内此对引物可有效地将水稻基腐病菌和其它属的菌区分开来。灵敏度检测中实时荧光PCR能检测到的模板DNA最低浓度为5×10-3ng/gl,以菌液为模板能检测到的最低浓度为102cfu/ml,比常规PCR灵敏度高10-100倍。模拟土壤和种子带菌的检测中均能检测到病菌,通过对人工接种的水稻茎基部病原菌的检测发现,实时荧光PCR检测第二天就检测到病菌的存在。应用这对特异性引物对水稻细菌性基腐病菌进行检测,快捷、准确。本方法可以直接对带菌的水稻植株进行定性检测。3.通过对感病植株种子、病田土壤和稻兜盆栽传病途径试验结果显示,病田土壤和病稻兜均具传病作用,幼苗期二者均不显症,分蘖至孕穗期表现典型的症状,应用实时荧光PCR检测,在分蘖期可检测出基腐病菌。根据盆栽试验病害症状表现和PCR检测结果表明,病菌可在土壤和病稻兜中存活,并成为下年度本病的初侵染来源。而种子在整个盆栽试验过程中,稻株未表现出症状,也未检测出病菌存在,病株种子可能不具传病作用。