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目的：卵巢恶性生殖细胞肿瘤(malignant ovarian germ cell tumors, MOGCTs),是来源于原始生殖细胞的一组卵巢恶性肿瘤,发病率仅次于上皮性肿瘤,好发于儿童及青少年。因此保留生育功能的手术联合术后化疗显得至关重要。多数恶性生殖细胞肿瘤对化疗极其敏感,化疗已成为非常重要的治疗手段。但化疗药物可引起多种不良反应,对多个器官系统造成损害,严重影响女性患者的生活质量,尤其对因卵巢功能损害而导致的月经紊乱、闭经、早绝经和不孕近年来日益得到学者们的关注。以不同浓度的顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素作用于人卵巢恶性生殖细胞肿瘤畸胎瘤细胞株PA-1,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素对恶性畸胎瘤PA-1细胞株的半数致死量,以上述四种药物的半数致死量作用于人卵巢颗粒细胞,探讨顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素对人卵巢颗粒细胞的生长及其功能的影响。方法：1体外培养人卵巢生殖细胞肿瘤畸胎瘤细胞株PA-1,将其按常规方法培养于含10%的胎牛血清及青、链霉素(100U/ml)的MEM培养基中,在37℃、5%CO2、恒温、饱和湿度条件下培养。将处于对数生长期的细胞用0.25%的胰酶消化,制成单细胞悬液备用。2将PA-1细胞株以细胞密度为6.5×104/孔接种于96孔板中,加入不同浓度的顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素,作用48h后,MTT比色法观察其对PA-1细胞株的生长增殖作用,并测定其半数致死量(IC50)。3人卵巢颗粒细胞收集取自2010年3月～2010年11月期间在河北医科大学第二医院生殖医学科行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的卵泡穿刺术患者,均为输卵管不通或男性原因不孕的女性,月经周期,排卵功能及内分泌功能均正常。长周期方案超促排卵妇女,注射人绒毛膜促性腺激素34～36h后,在B型超声引导下经阴道取卵。4体外培养人卵巢颗粒细胞以对PA-1细胞株的半数致死量的顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素作用于人卵巢颗粒细胞72h后,MTT比色法测定对颗粒细胞活性的影响,化学发光法测定颗粒细胞上清液雌激素水平,免疫细胞化学法观察颗粒细胞Bc1.2/Bax表达情况。结果：1顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素对人卵巢恶性生殖细胞肿瘤畸胎瘤细胞株PA-1的影响1.1 PA-1细胞株的生长情况倒置相差显微镜下观察,PA-1细胞株生长状态良好,呈梭形,加入化疗药物后,有些细胞由伸展开的梭形变为圆形,随着药物浓度的增加,细胞膜开始皱缩,圆形细胞逐渐增多,细胞体积逐渐变小,形态不规则,细胞膜不再完整,细胞质浓缩,细胞的贴壁能力降低,最后漂浮。1.2 MTT比色法检测顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素对PA-1细胞株的半数致死量不同浓度的顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素作用于PA-1细胞株48h后均出现随着剂量的增大抑制作用增强,其半数致死量分别为顺铂0.55 mg/L,VP-161.67 mg/L,长春新碱1.8μg/L,博来霉素1.7 mg/L2对恶性畸胎瘤PA-1细胞株的半数致死量的顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素对人卵巢颗粒细胞的影响2.1人卵巢颗粒细胞体外生长情况经苔盼蓝染色,细胞成活率达90%以上。倒置相差显微镜下观察,人卵巢颗粒细胞刚接种时细胞呈圆形,6h后贴壁,24h后贴壁达到90%以上,细胞形态规则呈梭形,细胞核大,圆形,HE染色后细胞浆富含空泡及颗粒。细胞有聚集生长现象。2.2 MTT比色法检测结果与空白对照组相比,顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素组吸光度值均有所降低,除长春新碱组外均有统计学差异(P>0.05),组间比较,除VP-16与博来霉素组相比无统计学差异(P>0.05)外,各组间均有统计学差异(P<0.05)。2.3 E2水平检测结果与空白对照组相比,顺铂、VP-16、长春新碱、博来霉素组人卵巢颗粒细胞分泌E：水平均有所减少,除长春新碱组外,均有统计学差异(P<0.05),组间比较,除VP-16与博来霉素组相比,无统计学差异(P>0.05)外,各组间均有统计学差异(P<0.05)。2.4免疫细胞化学法检测Bcl-2/Bax结果光镜下观察Bcl-2/Bax定位于细胞浆,为棕黄色细密颗粒。本研究免疫细胞化学结果显示,空白对照组和各处理组均有Bcl-2/Bax表达。各组Bax表达较空白对照组有所增强,Bcl-2表达有所减弱。除长春新碱组外,各组与空白对照组相比,均有统计学差异(P<0.05)。结论：1 VP-16、博来霉素、顺铂、长春新碱作用于恶性畸胎瘤PA-1细胞株48h后均出现随着剂量的增大而抑制作用逐渐增强。2 VP-16、博来霉素、顺铂、长春新碱作用于恶性畸胎瘤PA-1细胞株48h的半数致死量分别为VP-161.67mg/L,博来霉素1.7 mg/L,顺铂0.55mg/L,长春新碱1.8μg/L。3对恶性畸胎瘤PA-1细胞株48h半数致死量的VP-16、博来霉素、顺铂对人卵巢颗粒细胞有显著促凋亡作用,长春新碱促凋亡作用不明显。4对恶性畸胎瘤PA-1细胞株48h半数致死量的VP-16、博来霉素、顺铂作用于人卵巢颗粒细胞,使其分泌E2能力有所下降,而长春新碱对其分泌E2的影响不明显。5 VP-16、博来霉素、顺铂、长春新碱通过下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白促进人卵巢颗粒细胞的凋亡。6 VP-16和博来霉素对恶性畸胎瘤PA-1细胞株的半数致死量对人卵巢颗粒细胞有显著促凋亡作用,顺铂次之,长春新碱无显著促凋亡作用。