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目的:探讨拉米夫定(LAM)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者血清和肝细胞乙型肝炎病毒(HBV)DNABCP/PC区准种特点及与2008年亚太肝脏研究协会(APASL)CHB诊疗指南(《指南》)停药标准[1](达标)后复发的关系。方法:研究对象:CHB患者接受LAM治疗达标后进行肝组织穿刺后停药患者43例,包括LAM初治患者25例,LAM经治患者18例。实验方法:两组患者在治疗基线时、复发患者同时在复发时收集血清,在达标停药时基线肝组织穿刺收集肝组织。分别用水煮法提取血清HBVrcDNA,HBVcccDNA特异性引物滚环(RCA)扩增肝细胞全长HBVcccDNA;使用多对引物经巢式PCR检测HBV基因型;采用相应引物经巢式PCR扩增血清HBVrcDNA和肝细胞HBVcccDNA的BCP、PC区,PCR产物经凝胶电泳及凝胶胶回收后克隆入PEASY-Teasy质粒,重组DNA转化到JM109大肠杆菌感受态细胞中,随机挑选内侧引物巢式PCR鉴定为阳性的克隆菌株20~32个进行测序。结果:(1)HBVDNABCP/PC区广泛存在多种碱基变异形式,无论是否接受LAM治疗。LAM治疗的CHB患者基线时和复发时、达标时肝组织HBVDNABCP/PC区准种碱基变异位点最高前5位位点中有多个位点变异率均为100%,均存在于优势克隆、次优势克隆和劣势克隆中。有1例(7.7%)初治患者基线时有野生株,有3例(7.0%)患者(包括2例初治患者、1例经治患者)达标时肝组织准种中有野生株。(2)LAM治疗的CHB患者基线时、达标时肝组织、复发时BCP变异均以nt1721/1762/1764/1775变异为多,PC区以nt1896/1913变异为多。以上6个位点与复发无明显相关,P值均大于0.05。Logistic单因素分析显示性别,年龄,家族史,基线DNA,基线HBeAg状态,基线ALT,基因型,总疗程,治疗,是否复发10个因素对基线血清rcDNA和达标时肝组织HBVcccDNA对以上6个变异位点检出率无明显影响,P值均大于0.05。(3)总体患者以及复发患者从基线血清HBVrcDNA至达标时肝组织至复发时HBVDNABCP/PC区准种碱基复杂度基本呈上升趋势。复发时的准种复杂度高于基线时的BCP/PC区准种复杂度,有统计学意义(0.7753±0.1727VS0.6413±0.2288,P=0.034<0.05),达标时肝组织与基线时和复发时准种复杂度均无统计学差异(P值分别为0.23、0.245,均大于0.05)。(5)初治组和经治组之间在基线时、达标肝组织、复发时3个时间点准种复杂度无明显统计学意义(P>0.05)。初治组内复发患者在以上3个时间点的样本的BCP/PC区准种碱基复杂度呈现上升趋势,未复发患者自基线至达标时准种碱基复杂度也是呈上升趋势。经治组内复发组在基线时、达标肝细胞BCP/PC区准种碱基复杂度呈现上升趋势,但至复发时准种复杂度又稍微下降,下降幅度小;未复发患者准种碱基复杂度自基线至达标时呈下降趋势。初治组和经治组之间的复发患者与未复发患者在基线和达标时肝细胞BCP/PC区准种复杂度无明显统计学差异(P值均大于0.05)。结论:(1)HBVDNABCP/PC区广泛存在多种碱基变异形式。LAM治疗CHB患者基线时的和复发时的血清、达标时的肝细胞HBVDNA高频变异位点均分别是nt1721/1762/1764/1775,nt1896/1913。以上变异位点与复发无明显相关。(2)LAM治疗CHB患者基线时的血清和达标时的肝细胞BCP/PC区准种复杂度及其变化趋势与复发无明显相关,基线至复发时血清BCP/PC区准种组成变化较明显。