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目的:
针对广西HIV主要流行毒株gag、pol、env基因区建立一种早期、快速、可行的多重巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法。
方法:
1.根据广西HIV主要流行毒株gag、pol、env 3个基因的保守序列,分别设计2套巢式RT-PCR引物。
2.应用已建立的巢式RT-PCR对60份经蛋白免疫印迹试验(WB)确证的HIV阳性血样进行检测,计算检出率。
3.从gag、pol、env区分别选择一套最佳引物,用巢式RT-PCR对60份阳性样本和30份阴性样本进行检测,并将检测结果与血清学检测结果比较,计算灵敏度和特异度,然后随机选取20份阳性样本重复检测3次,对检测方法的重复性进行评价。
4.从gag、pol、env 3个基因区分别选择1套巢式RT-PCR引物,搭配组合成2组多重套巢式RT-PCR反应体系,应用降落PCR技术,在同一反应管中对以上60份HIV阳性样本和30份HIV阴性样本进行检测,检测结果与血清学检测结果比较,计算灵敏度和特异度。从60份样本中随机抽取20份,重复检测3次,计算检测方法的重复性。
5.以已知拷贝数的一系列HIV RNA模拟窗口期样本,应用已建立的多重巢式RT-PCR进行检测,并检验此方法的检测下限。
结论:
本研究所建立的核酸检测方法灵敏度和特异度高,重复性好,适用于广西HIV感染的早期检测,可缩短ELISA抗体初筛和WB确证试验的“窗口期”。