目的：　　 1．开展浙江省耳聋分子流行病学调查，完善非综合征型耳聋资源数据库，并进行聋病分子机制研究。　　 2．对温州、宁波两地门诊的非综合征型耳聋患者人群进行线粒体DNAC1494T突变检测，估算C1494T突变的发生频率，完善省内药物性耳聋监控系统。　　 3．采集携带线粒体DNAC1494T突变的耳聋家系，分析分子这些家系的遗传特点，深入探讨母系遗传药物性耳聋的分子致病机制。　　 4．筛查与非综合征型耳聋相关的线粒体tRNALu(UUR)、tRNAIle和tRNALys基因突变，初步探讨线粒体tRNA基因突变与耳聋的关系。　　 方法：　　 1．拟定耳聋分子流行病学调查工作程序，完善浙江省耳聋遗传资源采集网络，以省内各地聋哑学校及门诊的聋病资源为中心，采集耳聋患者的临床、家系资料和血液样本。　　 2．以温州、宁波两地非综合征型耳聋患者为研究对象，采用常规PCR扩增、测序技术和本实验室自主研发的《用于同时检测线粒体DNAA1555G和C1494T突变的试剂盒》，进行线粒体DNAC1494T突变检测，计算突变频率。　　 3．完善线粒体DNAC1494T突变携带者及其家属的临床和遗传资料，进行详细的听力学检测、系谱分析、线粒体基因组全序列分析，评估氨基糖甙类药物、单体型、继发突变、核基因对C1494T突变表型表达的影响。　　 4．以温州地区聋哑学校及门诊病例为研究对象，采用常规PCR扩增和测序技术进行线粒体tRNALeu(UUR)、tRNAIle和tRNALys基因突变筛查。对新突变位点进行保守性分析、二级及高级结构预测等，评估这些突变位点与聋病相关性。　　 结果：　　 1.2008年4月-2011年3月，我们在温州、宁波两地共收集门诊病例521例。迄今本人所在研究团队所建立的耳聋遗传资源库，共有2163例非综合征型耳聋样本，其中1542例来自全省10个地市聋哑学校，621例来自温州、宁波两地医院门诊。　　 2．通过温州、宁波两地621例非综合征型耳聋患者线粒体DNAC1494T突变的检测，我们发现了两例突变携带者，检出率为（突变携带者/患者总数）0.32％。药物性耳聋患者占调查总数的16.46％，线粒体DNAC1494T突变携带者占药物性耳聋患者的1.94％。　　 3．对两个携带线粒体DNAC1494T突变的氨基糖甙类药物性非综合征型耳聋家系(NB133、FE247)进行临床数据统计和分子遗传学分析，两个家系NB133和FE247的耳聋外显率（母系成员耳聋患者/所有母系成员）分别为33.3％和11.1％，平均值为22.2％，非药物性耳聋的外显率（非药物性聋患者/所有母系成员）则分别为11.1％和5.6％，平均值为8.3％。先证者的线粒体全序列分析表明，两个线粒体基因组分别属于东亚人群C4a1a和B4b1c单体型。NB133家系同时携带了C1494T和G7444A突变，但其外显率与其他已报道家系并无显著性差异。核基因GJB2的突变检测结果显示，两位先证者均不携带与耳聋相关的致病突变位点。　　 4．采集温州地区222例非综合征型耳聋样本进行线粒体tRNALeu(UUR)、tRNAIle和tRNALys基因突变筛查，在五个耳聋患者中发现四个不同的变异位点：tRNALeu(UUR)T3290C，tRNAIleA4317G，tRNALysA8343G和C8346A突变，这四个变异位点均位于tRNA的TψC环上。其中，3290和8343位点为多态性位点。保守性分析表明，tRNAIle4317位点的保守系数高达85.7％，其次是tRNALys8346位点。目前尚未见tRNALysC8346A突变与疾病相关的报道。　　 结论：　　 1．线粒体DNAC1494T突变在温州、宁波两地621例非综合征型耳聋患者中的检出率为0.32％，占药物性耳聋人数的1.94％。　　 2．在两个携带线粒体DNAC1494T突变的氨基糖甙类药物性非综合征型耳聋家系中，氨基糖甙类药物增强了C1494T突变的耳聋表型表达，线粒体单体型、线粒体DNA7444G＞A突变、GJB2基因对C1494T突变的修饰作用不明显。　　 3．在温州地区222例非综合征型耳聋样本的线粒体tRNALeu(UUR)、tRNAIle和tRNALys基因突变筛查中，发现四个变异位点：tRNALeu(UUR)T3290C，tRNAIleA4317G，tRNALysA8343G和C8346A，其中，tRNAIleA4317G和tRNALysA8343G突变可能与非综合征型耳聋相关。