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蔗糖非发酵-1-型相关蛋白激酶-1(SnRK1)是一类丝/苏氨酸蛋白激酶,该基因已在很多植物中被克隆出来。研究发现SnKR1在调节植物能量代谢和逆境胁迫应答等方面发挥着重要作用。为了探究SnRK1蛋白激酶在毛竹中的特性,本研究克隆了毛竹PeSnRK1a基因,并对其在毛竹实生苗的各组织中的表达水平,以及胁迫条件下其在毛竹叶片中的表达水平进行检测;借助原核表达系统,在体外表达毛竹PeSnRK1a蛋白;对过表达PeSnRK1a基因的拟南芥叶片进行黑暗处理,对其种子进行盐胁迫处理并检测其发芽率;主要研究结果如下:1.通过同源基因克隆的方法,从毛竹中成功克隆了SnRK1基因,命名为PeSnRK1a。基因序列分析结果表明:PeSnRK1a基因的开放阅读框序列全长含有1509个碱基,共编码502个氨基酸,相对分子量为57.4kDa,等电点为8.67,为亲水性氨基酸。同源序列对比分析结果显示,PeSnRK1a与拟南芥、高粱、玉米和水稻等其它植物SnRK1同源基因的同源性高达76.22%-92.29%。系统进化树聚类结果显示其与玉米ZmSnRK1a、高粱SbSnRK1a的亲缘关系最近。蛋白保守结构域分析结果显示:PeSnRK1a含有典型的STKc、UBA和KAI结构域。2.利用实时荧光定量PCR检测了PeSnRK1a基因在毛竹实生苗的组织部位的相对表达水平,结果显示:PeSnRK1a在2月龄的毛竹实生苗的根、茎、叶中都有表达,且在叶中表达量最高;黑暗和盐胁迫能够诱导毛竹叶中PeSnRK1a的表达。3.构建PeSnRK1a原核表达载体,在体外诱导表达PeSnRK1a蛋白。结果表明:以BL21(DE3)和Rosetta(DE3)为表达菌株,采用pMal-c2x表达载体,以1mM IPTG为诱导剂,在诱导温度分别为20℃,37℃的条件下,PeSnRK1a蛋白主要以包涵体的形式存在。4.建立蛋白免疫印迹法检测SnRK1蛋白激酶的活性的方法体系。以在大肠杆菌中表达纯化的SAMS多肽作为SnRK1蛋白激酶的底物,利用磷酸化抗体检测SAMS多肽的磷酸化水平来检测拟南芥SnRK1蛋白激酶的活性。5.构建了PeSnRK1a植物过表达载体,用花器浸泡法侵染拟南芥。与野生型拟南芥相比,过表达PeSnRK1a的拟南芥植株在正常培养条件下,在种子发芽时间,叶片形态特征,开花及衰老时间等方面没有明显差异。过表达PeSnRK1a基因的拟南芥的离体叶片在黑暗条件下可以延缓衰老。在含有100-200mM氯化钠的培养基上,过表达PeSnRK1a基因的拟南芥种子发芽率明显高于野生型种子。