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目的:通过网络药理学方法预测黄连解毒汤防治脂质代谢紊乱的潜在分子生物学机制,探讨清热解毒法对高脂血症大鼠肝脏脂质代谢与炎症反应的作用及机制。材料与方法:1.通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)中寻找与黄连解毒汤中4味中药相关的所有化学成分和活性成分作用靶点,并构建药物分子-靶点网络;再用TTD、Dis Ge NET、Drug Bank数据库筛选与HLP相关的靶标,利用STRING数据库(功能蛋白联合网络数据库)构建药物-疾病靶点的蛋白质-蛋白质交互网络;找出核心靶点进行网络拓扑分析,利用DAVID数据库对核心靶点蛋白进行GO分析及KEGG通路富集分析。2.40只SPF级健康SD大鼠自由摄食饮水,适应性喂养7天后,随机平均分正常组、模型组、黄连解毒汤组、辛伐他汀组,每组10只。正常组每日给予普通饲料,模型组、黄连解毒汤组和辛伐他汀组每日给予高脂饲料,自由摄食,饮水不限。8周后,模型组、黄连解毒汤组和辛伐他汀组继续高脂饲料喂饲,同时灌胃给药,给药剂量按等效剂量折算系数换算,黄连解毒汤组给予中药饮片270mg/kg日一次灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀1.8mg/kg日一次灌胃,模型组则每日给予等体积的生理盐水灌胃。治疗4周后,检测大鼠血清中血脂TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;苏木素-伊红(HE)染色观测各组大鼠肝脏组织形态学变化、油红O染色(ORO)法观测各组大鼠肝脏组织中脂质沉积情况;Western Blot方法检测肝脏中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达以及RT-PCR技术检测肝脏中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、TNF-a的m RNA表达。结果:1.黄连解毒汤复方中4种药物的活性成分依据筛选条件OB(口服生物利用度)≥30%、DL(药物相似性)≥0.18筛选出黄柏34个、栀子16个、黄连14个、黄芩36个,删除重复共83个活性成分,黄连解毒汤共有249个靶点。用过TTD数据库、Dis Ge NET数据库、Drug Bank数据库三个数据库共有254个高脂血症疾病靶点。黄连解毒汤组与疾病靶点映射靶点41个,主要涉及CRP、TNF、IL1B、IL6、MAPK1、NOS3、VCAM1等。根据GO功能富集分析得到GO条目分为三类,其中生物学过程(biological process,BP)有809项、细胞组分(Cellular Components,CC)有98项、分子功能(molecular function,MF)有231项。KEGG富集结果显示根据PValue升序选取前30条与HLP相关通路,包括NOD样受体信号通路(NOD-like receptor signaling pathway)、肿瘤坏死因子信号通路(TNF signaling pathway)、细胞凋亡通路(Apoptosis)、Fox O信号通路(Fox O signaling pathway)、血小板活化通路(Platelet activation),其中NOD样受体信号通路是NLRs家族主要的炎症反应通路,NLRP3炎症小体参与的细胞焦亡也介于此通路。2.血脂水平结果示:与正常组对比,模型组TC、TG、LDL显著高于正常组(P<0.01),HDL显著低于正常组(P<0.01);与模型组比较,黄连解毒汤组和辛伐他汀组TC、TG、LDL水平显著降低(P<0.01),HDL水平显著升高(P<0.05)。3.HE染色检测结果示:与正常组对比,模型组肝脏有大量脂肪空泡形成;与模型组比较,黄连解毒汤组和辛伐他汀组肝脏脂肪空泡明显减少。4.油红O染色检测结果示:与正常组相比,模型组肝细胞结构不清晰,可见大量大小不一满视野的红色脂滴,并出现脂滴聚集;与模型组比较,黄连解毒汤组和辛伐他汀组胞浆呈浅蓝色,红色脂滴数量显著减少。5.Western blot检测肝脏NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达结果示:与正常组对比,模型组大鼠肝脏NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达水平显著高于正常组(P<0.01);与模型组比较,黄连解毒汤组和辛伐他汀组NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。6.RT-PCR检测肝脏NLRP3、GSDMD、caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18 m RNA表达结果示:与正常组对比,模型组大鼠肝脏NLRP3、GSDMD、caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18 m RNA表达水平显著高于正常组(P<0.01);与模型组比较,黄连解毒汤组和辛伐他汀组NLRP3、GSDMD、caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18 m RNA表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:1.黄连解毒汤是通过多成分、多靶点、协同调控NOD样受体信号通路等与脂质代谢、炎症反应、氧化应激等信号通路以发挥抗HLP的作用。2.黄连解毒汤可有效调控高脂血症大鼠的血脂水平,减少炎性因子,改善肝脏组织细胞。3.黄连解毒汤改善高脂血症大鼠肝脏组织损伤的机制,有可能与抑制NLRP3介导的炎症反应和细胞焦亡有关。