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目的:通过建立成年SD大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,探讨硫化氢(H2S,以Na HS为供体)后处理对缺氧/复氧损伤成年大鼠心肌细胞的影响,以评价其心肌保护作用及其可能的机制。方法:1.应用Langendorff离体心脏灌注装置分离大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,将分离的同批次的心肌细胞培养20h后,随机分为:正常组(N组)、缺氧/复氧组(IR组)、缺氧后处理组(IPTC组)、硫化氢后处理(S组)。N组持续培养120 min;IR组缺氧60min,复氧60 min;IPTC组缺氧60 min后即刻复氧3 min/缺氧3 min,重复3次后复氧60 min;S组复氧前用含终浓度为10μmol/L Na HS的培养液作用2 min,其余操作与IR组相同;采用激光共聚焦显微镜,检测各组心肌细胞内F-肌动蛋白/G-肌动蛋白(F-actin/G-actin)荧光强度的比值以及Western-blot技术检测各组心肌细胞p38MAPK磷酸化(p-p38MAPK)水平。2.同方法1建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,将分离的同批次的心肌细胞培养20h后,随机分为:正常组(N组)、缺氧/复氧组(IR组)、缺氧后处理组(IPTC组)、硫化氢后处理组(S组)、细胞松弛素D+正常组(C+N组)、细胞松弛素D+缺氧/复氧组(C+IR组)、细胞松弛素D+缺氧后处理组(C+IPTC组)和细胞松弛素D+硫化氢后处理组(C+S组),共8组。加入细胞松弛素D(Cy D)的四组分别于缺氧前加入Cy D 1μg/ml处理60 min,继而处理方式同方法1。采用激光共聚焦显微镜,检测各组心肌细胞内Ca2+、p H值的荧光强度。结果:1.F-actin/G-actin荧光强度比值和p-p38MAPK水平的变化:F-actin/G-actin荧光强度比值:与N组比较,IR组、IPTC组和S组荧光强度比值均升高(P<0.05);与IR组比较,IPTC组和S组均升高(P<0.05);S组高于IPTC组(P<0.05)。p-p38MAPK水平:IR组磷酸化水平高于N组、IPTC组和S组(P<0.05);S组、IPTC组、N组组间比较差异无统计学意义2.细胞松弛素D(Cy D)对细胞内Ca2+、p H值荧光强度的影响细胞内Ca2+荧光强度:(1)IR组Ca2+荧光强度高于N组、IPTC组和S组(P<0.05);S组、IPTC组与N组比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)加入Cy D后的各组荧光强度与所对应的N组、IR组、IPTC组和S组比较均显著升高,且均高于N组(P<0.05);(3)加入Cy D四组与N组钙离子荧光强度差值分别用:N-N,IR-N,IPTC-N以及S-N表示,IR-N,IPTC-N和S-N大于N-N(P<0.05),IR-N高于IPTC-N和S-N(P<0.05);IPTC-N高于S-N(P<0.05)。细胞内p H值荧光强度:(1)IR组低于N组、IPTC组与S组(P<0.05);N组、IPTC组与S组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)加入Cy D后,C+N组、C+IR组高于所对应的N组、IR组,且均高于N组(P<0.05);C+IPTC组、C+S组低于所对应的IPTC组、S组,且均低于N组(P<0.05)。结论:1.硫化氢后处理促进成年大鼠心肌细胞F-肌动蛋白的重塑,对心肌细胞骨架的正常结构有一定的保护作用。2.缺氧/复氧增加成年大鼠心肌细胞内p38MAPK磷酸化水平,硫化氢后处理可抑制p38MAPK磷酸化水平。3.硫化氢后处理可以减轻缺血心肌细胞内钙超载以及稳定缺血心肌细胞p H值,对缺血再灌注心肌有一定的保护作用,其保护机制可能与硫化氢稳定细胞骨架,阻止微丝的解聚有关。