【摘 要】
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目的:该实验旨在通过对肺腺癌A549细胞进行平面及立体培养,探讨其在耐药性方面的差异及产生差异的可能机制,阐明E-钙粘素及相关的PI3K信号转导通路在多细胞耐药中的调节作用.
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目的:该实验旨在通过对肺腺癌A549细胞进行平面及立体培养,探讨其在耐药性方面的差异及产生差异的可能机制,阐明E-钙粘素及相关的PI3K信号转导通路在多细胞耐药中的调节作用.方法:该研究以肺腺癌A549细胞为研究对象,在体外进行平面及立体培养.分两部分进行了研究:1)采用旋转培养瓶及水平恒温振荡的方法建立体外三维立体细胞膜型,并通过倒置显微镜、扫描电镜等方法证实三维立体细胞模型的成功建立.采用蛋白印迹、流式细胞、免疫组化、MTT等技术方法,比较平面培养及立体培养细胞在E-钙粘素的表达、细胞毒性药物(ADM)敏感性、细胞周期、细胞凋亡及相关蛋白(p27、Bcl-x1、Bad)表达的差异;其次在给予E-钙粘素拮抗剂SHE78-7后,再次比较平面培养及立体培养细胞在细胞毒性药物(ADM)敏感怀、细胞周期、细胞凋亡及相关蛋白(P27、Bcl-x1、Bad表达的差异.2)采用蛋白印迹、流式细胞、免疫组化、MTT等技术方法,①比较平面及立体培养细胞PI3K信号转导通路相关蛋白(PAkt、Akt)的表达差异;②给予E-钙粘素拮抗剂SHE78-7后,比较PAkt、Akt表达情况的变化;③给予PI3K阻滞剂LY294002后,比较两者在细胞毒性药物(ADM)敏感性、细胞周期、细胞凋亡及相关蛋白(Bcl-x1、Bad)表达的差异.
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