背景:虽然上皮向间质转化（EMT）在癌症转移中的作用仍有争论,但已有研究证实,在原发性乳腺癌中有小部分癌细胞可以发生EMT。作者所在的Heide.Ford教授实验室之前已经证明,乳腺癌细胞经历了上皮间质转化后,通过旁分泌介导激活非经典GLI活性可以增加邻近癌细胞的转移,这种效应依赖于EMT癌细胞中Six1的高表达。然而高表达Six1的EMT细胞通过什么具体的分子途径激活了周围细胞的GLI信号尚未清楚。方法:在本课题研究中,我们首先使用q RT-PCR、western blot和ELISA比较了乳腺癌EMT细胞和非EMT细胞中VEGF-C的表达水平。然后我们收集EMT细胞的条件培养基,往条件培养基中加入VEGF-C中和抗体或者普通的Ig G抗体后刺激非EMT细胞,随后我们检测了非EMT细胞的恶性特性,包括增殖试验、迁移试验、侵袭试验和细胞免疫荧光试验,以及Gli信号活性检测。我们还利用TCGA和GEO数据集分析了VEGFC和GLI通路信号之间的关系。此外,我们在非EMT细胞中敲除NRP2,然后用EMT细胞的条件培养基（含/不含VEGF-C抗体）处理非EMT细胞,并重新检测GLI信号活性。为了建立异种移植瘤模型,我们使用荧光素酶标记非EMT细胞并且敲除NRP2,敲除EMT细胞中的VEGF-C。我们将标记的非EMT细胞（SCR对照组和sh NRP2组）与非标记的非EMT细胞和EMT细胞（SCR对照组和sh VEGF-C组）分别混合,将混合在一起的细胞注射到小鼠乳房脂肪垫中,每周追踪荧光素酶信号。结果:在本研究中,我们在乳腺癌模型中发现了非经典GLI信号通路激活的新机制,用简单的话来总结就是,肿瘤EMT细胞旁分泌VEGF-C激活周围非EMT肿瘤细胞的非典型GLI信号,从而促进了非EMT乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。我们进一步证明,无论是在体外还是在体内,通过抑制EMT细胞中的VEGF-C,还是通过抑制与VEGFC相互作用的非EMT细胞表面的NRP2受体,EMT细胞向邻近癌细胞传递侵袭表型的能力都可以被逆转。对人类乳腺癌TCGA和GEO公共数据集的分析也支持了这一论证,我们发现VEGF-C和GLI信号通路基因显著正相关。结论:我们的研究表明,旁分泌VEGF-C/NRP2/GLI轴可能是肿瘤EMT细胞增强转移的一种新颖的、稳定的途径,并为乳腺肿瘤这种异质性疾病的个体化治疗干预提供了潜在的靶点。