黄褐毛忍冬总皂苷脂质体在动物体内的分布及初步药效学研究

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目的:本课题在已有的研究基础上,将黄褐毛忍冬总皂苷制成肝靶向性制剂,通过探讨黄褐毛忍冬总皂苷脂质体对小鼠急性CCL4肝损伤模型的治疗及保护作用,研究其在小鼠体内的分布,提高其临床治疗效果,为黄褐毛忍冬总皂苷的临床应用奠定实验基础。  方法:①建立黄褐毛忍冬总皂苷中α-常春藤皂苷的含量测定方法采用HPLC法对黄褐毛忍冬总皂苷中α-常春藤皂苷进行含量测定,色谱柱为Welchrom C18(5μm,4.6×250mm);流动相∶乙腈-0.1%磷酸溶液(43∶57);流速1.0ml·min-1;检测波长为205nm。②黄褐毛忍冬总皂苷脂质体的包封率测定及初步稳定性研究在已有的研究基础上,采用乙醇注入法制备脂质体,采用微柱离心法和葡聚糖凝胶柱层析法测定其包封率,并对其稳定性进行研究。③黄褐毛忍冬总皂苷脂质体对小鼠急性肝损伤的保护及治疗作用建立小鼠急性CCL4肝损伤模型,通过测血清ALT和AST含量,以及取肝脏做病理组织学检查,HE染色,观察不同剂量黄褐毛忍冬总皂苷脂质体对CCL4肝损伤模型的保护作用;建立小鼠急性CCL4肝损伤模型,通过测血清ALT和AST含量,以及取肝脏做病理组织学检查,HE染色,观察不同剂量黄褐毛忍冬总皂苷脂质体对CCL4肝损伤模型的治疗作用。④黄褐毛忍冬总皂苷脂质体的体内分布以不同量的荧光染料脂溶性DiI标记乙醇注入法制备的脂质体,标记黄褐毛忍冬总皂苷脂质体;将小鼠体内组织的冷冻切片用荧光显微镜观察,考察荧光染料脂溶性DiI标记黄褐毛忍冬总皂苷脂质体的量;利用共聚焦激光扫面显微镜(confocal laser scarm-ing microscope,CLSM)观察荧光标记的脂质体150min、30min和1h、2h、4h、6h在小鼠体内组织的荧光强弱及分布。  结果:①α-常春藤皂苷在0.32μg-1.62μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.07%,RSD为1.11%(n_6)均符合要求。②采用微柱离心法测得的黄褐毛忍冬总皂苷脂质体的包封率最好为50.88%。考察室温放置96h内黄褐毛忍冬总皂苷脂质体中总皂苷包封率无明显下降。3个月内黄褐毛忍冬总皂苷脂质体没有出现浑浊、聚集、颜色变化现象。③两试验中黄褐毛忍冬总皂苷脂质体均能显著降低小鼠血清ALT、AST活性,且向正常水平恢复,说明黄褐毛忍冬总皂苷脂质体对CCL4诱导小鼠急性肝损伤均有较好的保护及治疗作用;从病理组织切片结果同样可以初步判断出,黄褐毛忍冬总皂苷脂质体各剂量组均对CCL4诱导小鼠急性肝损伤有较好的治疗之保护作用。④荧光显微镜下观察到用不同量的荧光染料脂溶性DiI标记的脂质体,DiI的用量为脂质体质量的5%时,荧光染料脂溶性DiI染色的黄褐毛忍冬总皂苷脂质体的荧光最强。⑤在CLSM下观察到在15min、6h时肝、脾、肾、肺组织切片内荧光较弱,在30min、1h、2h、4h均观察到肝组织切片比脾、肺、肾组织切片的荧光强,在1h时肝组织切片中的荧光最强。  结论:本实验证明,制备的黄褐毛忍冬总皂苷脂质体对小鼠急性CCL4肝损伤模型有治疗及保护作用,通过小鼠体内分布研究试验证明黄褐毛忍冬总皂苷脂质体有明显的肝靶向性。
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