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目前,研究表明,miR-148a-3p可以调控前体脂肪细胞的分化以及脂质的形成;PTEN可以通过抑制PI3K-AKT信号通路抑制前体脂肪细胞分化;PTEN是miR-148a-3p的一个潜在的靶基因。本试验旨在建立体外家兔诱导分化模型以及验证miR-148a-3p可以靶向PTEN调控家兔前体脂肪细胞成脂分化。试验结果如下:(1)miR-148a-3p在5月龄家兔肾周脂肪组织中的表达量极显著高于初生仔兔(P<0.01);(2)成功分离家兔前体脂肪细胞,鸡尾酒法诱导成脂分化后,油红O染色发现第二天出现大量的小脂滴,第六天开始出现脂滴的汇聚,第十天时,脂滴明显增多,且大脂滴也明显增多,出现成熟脂肪细胞的特征。标志基因测定发现,符合前体脂肪细胞分化规律。随着前体脂肪细胞分化时间的推移,miR-148a-3p的表达量呈逐渐上调的趋势;(3)转染miR-148a-3p类似物mimic后,细胞内miR-148a-3p的表达显著上调(P<0.01)。诱导前体脂肪细胞分化,结果显示mimic可以促进前体脂肪细胞分化,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα和FABP4基因的mRNA水平均显著上升(P<0.05),脂肪酸和甘油三酯的含量极显著增加(P<0.01)。转染miR-148a-3p抑制剂inhibitor,细胞内miR-148a-3p的表达显著下调(P<0.05)。诱导前体脂肪细胞分化,结果显示inhibitor可以抑制前体脂肪细胞分化,标志基因PPARγ、C/EBPα和FABP4基因的mRNA水平均显著降低(P<0.05),脂肪酸和甘油三酯的含量极显著降低(P<0.05)。(4)生物信息学预测结果发现,PTEN基因是miR-148a-3p的一个潜在的靶基因,且有两个结合位点。双荧光素酶报告试验发现,miR-148a-3p可以作用PTEN基因的其中一个位点(P<0.01),另一个结合位点并无靶向关系。(5)过表达miR-148a-3p后,可以下调PTEN基因mRNA和蛋白质的表达水平(P<0.01)。抑制表达miR-148a-3p后,可以上调PTEN基因mRNA和蛋白质的表达水平(P<0.05)。(6)抑制家兔前体脂肪细胞内源性PTEN基因的表达量,PTEN表达量下降了约60%,可以促进细胞成脂分化,上调脂肪酸的合成,甘油三脂的含量,分化相关基因C/EBPα、PPARγ和FABP4基因的mRNA水平均显著上升(P<0.05),与过表达miR-148a-3p实验结果一致。综上所述,体外家兔诱导分化模型建立成功,且在家兔前体脂肪细胞分化过程中,miR-148a-3p可以通过靶向PTEN基因促进家兔前体脂肪细胞分化。