【摘 要】
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目的:葡萄糖来源的糖化终末产物（glucose-derived AGEs）与众多肿瘤的发生发展密切相关,但具体机制尚不明确。本研究探讨glucose-derived AGEs对胃肠道肿瘤侵袭转移的影响和潜在机制。方法:（1）收集未合并糖尿病的大肠癌/胃癌患者和正常对照者的血液,离心取上清,蛋白电泳检测血清中glucose-derived AGEs的含量。（2）收集未合并糖尿病的大肠癌/胃癌患者的肿
【基金项目】
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国家自然科学基金8137093,81670743；
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目的:葡萄糖来源的糖化终末产物（glucose-derived AGEs）与众多肿瘤的发生发展密切相关,但具体机制尚不明确。本研究探讨glucose-derived AGEs对胃肠道肿瘤侵袭转移的影响和潜在机制。方法:（1）收集未合并糖尿病的大肠癌/胃癌患者和正常对照者的血液,离心取上清,蛋白电泳检测血清中glucose-derived AGEs的含量。（2）收集未合并糖尿病的大肠癌/胃癌患者的肿瘤组织和配对的正常组织,提取组织标本的RNA和蛋白分别进行RT-PCR和蛋白电泳,观察RAGE的表达情况,同时检测glucose-derived AGEs的组织含量及Sp1,MMP2的表达情况。（3）对大肠癌/胃癌胃癌标本进行石蜡包埋,切片行免疫荧光染色,观察对比大肠癌/胃癌组织和正常组织中RAGE,Sp1的表达位置和表达丰度,并结合临床资料分析RAGE的表达与大肠癌/胃癌临床病理因素间的相关性。（4）体外培养8株大肠癌/胃癌肿瘤细胞,抽提细胞RNA和蛋白,分别行RT-PCR和蛋白电泳,观察RAGE的表达,筛选合适的细胞进行下一步实验。（5）体外实验中,使用不同浓度的glucose-derived AGEs及RAGE的特异性抗体处理大肠癌/胃癌细胞系,观察大肠癌/胃癌细胞侵袭转移能力的变化,并通过细胞免疫荧光,蛋白电泳及明胶酶谱实验观察细胞中RAGE,Sp1和MMP2的表达情况及培养液中基质金属蛋白酶MMP2的活性。（6）构建Sp1特异性的si RNA,转染大肠癌/胃癌细胞,观察对glucose-derived AGEs诱导的侵袭转移的影响,及对RAGE,MMP2表达的影响。（7）构建RAGE干扰慢病毒,转染筛选RAGE稳定敲低的稳转细胞株,并行裸鼠门静脉注射,构建大肠癌肝转移模型。30 mg/kg的glucose-derived AGEs腹腔注射,隔天一次,2个月后观察大肠癌肝转移情况。（8）构建RAGE干扰慢病毒,转染筛选RAGE稳定敲低的稳转细胞株,并行裸鼠腹腔注射,构建胃癌腹腔转移模型。30 mg/kg的glucose-derived AGEs腹腔注射,隔天一次,2个月后观察胃癌腹腔转移情况。（9）200μg/ml的glucose-derived AGEs处理Hep3B和Hep G2细胞,抽提细胞蛋白进行蛋白电泳,观察RAGE的表达变化情况,并选择反应敏感的细胞进行后续实验。（10）使用不同浓度的glucose-derived AGEs处理Hep3B细胞,油红O染色观察细胞中脂质的沉积。（11）不同浓度的glucose-derived AGEs处理Hep3B细胞后,提取细胞蛋白,蛋白电泳,观察Sp1,SREBP1c的表达情况。结果:（1）大肠癌患者glucose-derived AGEs的血清和组织含量及大肠癌组织中RAGE,Sp1和MMP2的表达明显增加。体外glucose-derived AGEs处理诱导大肠癌细胞的侵袭转移,并上调RAGE,Sp1和MMP2的表达。体内glucose-derived AGEs处理促进裸鼠大肠癌肝转移。（2）胃癌患者的glucose-derived AGEs的血清和组织含量及胃癌组织中RAGE,Sp1和MMP2的表达明显增加。体外,glucose-derived AGEs处理能促进胃癌细胞的侵袭转移,同时上调RAGE,Sp1和MMP2的表达水平。体内,腹腔注射glucose-derived AGEs明显增加了胃癌的腹腔转移。（3）Glucose-derived AGEs能促进Hep3B细胞中的脂质沉积,并剂量依赖性地上调RAGE,Sp1及SREBP1c的表达。
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