虎杖多糖的提取分离及结构鉴定

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本文采用水提醇沉法提取虎杖药材中的总多糖PP。采用DEAE-52阴离子交换色谱法、葡聚糖凝胶色谱法对总多糖进行分离纯化,获得5个均一多糖,分别为:PPⅠ、PPⅡ、PPⅢ、PPⅣ、PPⅤ。对总多糖、均一多糖的理化性质进行研究,采用分光光度法,分别以苯酚-硫酸法测定中性糖的含量,以间羟联苯法测定糖醛酸的含量,以考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。采用高效排阻层析法测定均一多糖的纯度及分子量,PMP柱前衍生HPLC法测定单糖组成。通过红外光谱、核磁共振波谱、甲基化综合解析其中3个均一多糖的结构。通过a-葡萄糖苷酶抑制活性实验,比较虎杖总多糖及均一多糖体外抑制a-葡萄糖苷酶活性。5个均一多糖的分子量分别为8774、6502、5544、4330、3829。纯化过程中中性糖、糖醛酸总含量增加,蛋白含量减少。虎杖总多糖PP中的中性糖、酸性糖、蛋白质含量分别为:54.52、9.35、10.01,单糖主要由葡萄糖、半乳糖、木糖组成,比例为23∶2.2∶1。均一多糖的中性糖含量接近100%,酸性糖含量较少,检测不到蛋白质,PMP柱前衍生得单糖组成主要为葡萄糖。三个均一多糖PPⅠ、PPⅡ、PPⅢ进行结构解析,结果表明它们都含有大量的α-(1→4)葡萄糖苷键,但组成重复单元的糖苷键类型和比例有区别。活性实验表明,虎杖总多糖有较好的a-葡萄糖苷酶抑制活性,均一多糖几乎无a-葡萄糖苷酶抑制活性,说明虎杖总多糖产生降糖活性的原因可能是由于虎杖多糖与色素、蛋白间有协同关系。
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