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本论文以杂色云芝为菌种,研究了部分金属离子及诱导剂对云芝分泌漆酶量的影响;并对发酵过程进行了分批补料和pH的调控;研究了云芝与丝状真菌共培养对漆酶分泌量的影响,建立了适宜的云芝发酵产漆酶的条件,达到了提高漆酶产量,降低漆酶生产成本的目的。研究结果如下:
(1)添加Cu2+适宜的浓度为300μmol/L且在发酵接种2d后添加,漆酶活力达到4558.4U/L,胞外蛋白含量达到2.65mg/ml;在发酵3d后添加500μmol/L的Mn2+较适宜。
(2)添加香兰素和愈创木酚的适宜浓度分别为250μmol/L和20μmol/L。自制两种价廉、易得的小分子介质A和B作为诱导剂能有效促进漆酶的合成。其中,小分子介质A作为诱导剂时漆酶酶活达到3493U/L。
(3)发酵培养基中最适的麸皮初始浓度和pH值分别为20g/L和5.0。发酵过程中进行pH调控和分批补料发酵均有利于云芝分泌漆酶。当以20g/L为补料量,连续补料三次,最高酶活达到3366.7U/L,且胞外蛋白含量也得到显著提高;当补料总量相同时,可以以递增、恒定、递减三种补料顺序进行补料,其中,以递减方式补料效果最好。
(4)云芝与丝状真菌液态共培养中,适宜的接种时间为云芝培养后第3d,漆酶酶活是空白样的2.2倍。