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目的研究晚期内皮祖细胞（EPCs）移植对野百合碱所致肺动脉高压（PAH）大鼠肺血流动力学的影响及其相关机制的研究。方法1.晚期EPCs的培养、鉴定与标记:处死大鼠后,迅速分离出其股骨与胫骨,无菌条件下冲洗骨髓腔,使用密度梯度离心法与差时贴壁法相结合的方法,分离培养EPCs,倒置显微镜下观察其生长情况及形态变化。培养至21天后,使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-ac-LDL）和FITC标记的荆豆素1（FITC-UEA-1）双荧光染色,细胞免疫表型法鉴定细胞表面抗原CD133、v WF、FIK1表达情况。细胞鉴定后,使用染料PKH26以4×10-6M的浓度标记晚期EPCs,备用,便于移植。2.实验分组及动物模型的制备:雄性Wistar大鼠50只,随机数表法分为造模组40只和空白组10只。造模组大鼠按50mg/Kg的量,给予颈背部皮下注射1%的野百合碱溶液,制备肺动脉高压模型,空白组大鼠给予皮下注射同等剂量的生理盐水。造模后,随机分为模型组、参附益心颗粒组、EPCs组和参附益心颗粒+EPCs组（联合组）。28天后,参附益心颗粒组和联合组每天给予参附益心颗粒灌胃（成人一日服用参附益心颗粒药量为205g,按照60kg成人与大鼠的折算系数为6.25,计算出大鼠所需等效量约为21.35g/Kg）,空白组、模型组和内皮祖细胞组大鼠每天给予等量生理盐水灌胃,连续灌胃28天。3.EPCs的移植:模型建立后,内皮祖细胞组和联合组经右侧颈外静脉注入500ul的PKH26标记过的EPCs,细胞密度为2×106个/ml,余则注入等量的EGM2内皮细胞培养基（EGM2）。细胞移植后,五组继续给予相应药物或生理盐水灌胃4周。4.平均肺动脉压力、心输出量及右心肥厚指数的测定:移植28天后,使用改良后的PE-50导管测大鼠的右心室收缩压（RVSP）、右心室舒张压（RVDP）和平均肺动脉压力（m PAP）,然后间接计算出大鼠肺血管阻力（PVR）。测量完肺动脉压力后,接着采用热稀释法测量大鼠的心输出量。计算大鼠的右心肥厚指数,即右心室（RV）/左心室+室间隔（LV+S）。5.EPCs在肺组织中的追踪:取大鼠右肺门处肺组织取标本,做冰冻切片,荧光显微镜下观察PKH26标记的内皮祖细胞在肺组织内的表达。6.ELISA法检测EPCs的旁分泌:药物干预4周后,处死大鼠,取血清,通过免疫酶联聚合反应（ELISA）方法,测定基质细胞衍生因子-1（SDF-1）、缺氧诱导因子（HIF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）的含量。7.实时荧光定量法检测EPCs相关生长因子和细胞凋亡相关基因:取肺组织标本,通过定量聚合酶链反应（q PCR）法,检测EPCs相关生长因子和细胞凋亡相关基因,主要包括基质细胞衍生因子-1（SDF-1）、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）和凋亡相关因子Bcl-2、Fasl。结果1.培养5天后细胞开始出现线状结构或者血岛样结构。14天后,线状及血岛样结构开始逐渐消失,随着细胞增殖的加速呈铺路石样结构。直至21天,细胞主要呈铺路石样,并逐渐铺满板面。倒置荧光显微镜下显示,EPCs摄取Dil-ac-LDL为红色荧光,摄取FITC-UEA-1为绿色荧光,双染阳性细胞为橙黄色。CD133、v WF、FIK均显示阳性标记物。经PKH26染色标记后,显微镜下为红色荧光。2.结果显示,各组m PAP、RVSP、RVDP、RV/（LV+S）及PVR均较空白组相比明显增高（P<0.05）,而CO和CI则较低（P<0.05）。参附组、EPCs组、联合组较模型组相比RVSP、RVDP、m PAP、RV/（LV+S）及PVR均降低（P<0.05）,而CO和CI则增高（P<0.05）。参附组与EPCs组相比（P>0.05）,无统计学意义。3.ELISA法检测EPCs的旁分泌:与空白组相比,各组血浆中的SDF-1、HIF-1与VEGF的含量明显较高（P<0.05）;与模型组组相比,参附组,EPCs组与联合组血浆中SDF-1、HIF-1与VEGF的含量明显较高（P<0.05）。内皮祖细胞移植后,肺动脉高压大鼠血浆中SDF-1、HIF-1、VEGF的含量明显增加,且联合组明显高于参附组与EPCs组。4.q PCR法检测EPCs相关生长因子和细胞凋亡相关基因:与空白组相比,其余四组肺组织中的VEGF、SDF-1、及HIF-1m RNA的表达明显增加（P<0.05）;与EPCs组、参附组相比,联合组肺组织中VEGF、SDF-1、及HIF-1m RNA的表达明显增加（P<0.05）。与空白组相比,模型组肺组织中的Fasl m RNA的表达明显增加;与模型组相比,参附组、EPCs组与联合组的Fasl m RNA的表达明显下调,且联合组明显低于参附组、EPCs组（P<0.05）;与空白组相比,模型组肺组织中的Bcl-2m RNA的表达明显下调;与模型组相比,参附组、EPCs组与联合组的Bcl-2m RNA的表达明显增加,且联合组明显高于参附组、EPCs组（P<0.05）;结论1.参附益心颗粒可以减轻野百合碱诱导肺动脉高压大鼠的肺血流动力学,改善心功能。2.晚期内皮祖细胞移植后可改善肺动脉高压大鼠的肺血流动力学,降低右心肥厚指数,改善心功能。3.晚期内皮祖细胞改善肺动脉高压的作用,可能与其促进VEGF、SDF-1、及HIF-1等相关生长因子的增加及调节Fasl、Bcl-2细胞凋亡基因有关。