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研究背景及目的:阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)是寄生在人体泌尿生殖道的一种常见病原体,可引起阴道毛滴虫病(Xrichomoniasis)。自1836年Donné首次描述该虫的特点及所致疾病的症状以来,至今仍是威胁人类健康的主要的性传播疾病之一。铁氧还蛋白(Ferredoxin Fd)是自然界分布很广的低分子量铁硫蛋白,最常见的是[2Fe-2S]Fd,在阴道毛滴虫中它是氢化酶体(Hydrogenosome)电子传递链的主要成分,它参与丙酮酸盐:铁氧还蛋白氧化还原酶(pyruvate:ferredoxin oxidoreductase PFOR)介导的丙酮酸盐氧化脱羧形成乙酰辅酶A和ATP反应,是此过程中的电子供体,通过电子传递参与了—线抗滴虫药物甲硝唑(metronidazole)在体内的活化。尽管应用甲硝唑已经数十年,其抗药性的发展还是较缓慢。然而,近年来临床上甲硝唑抗性株的发现和不断增加,使得对甲硝唑在体内的作用机制和抗药性的发展的研究就尤为重要。Quon和Johnson等发现滴虫抗性株细胞中Fd明显低于敏感株,Northern杂交分析,Fd的mRNA水平下降50-65%,基因转录下降40-65%,Land等通过实验发现药物高度抵抗的虫株内Fd mRNA的水平下降90%,免疫印记显示,在高度抵抗株内几乎检测不到PFOR和Fd,甲硝唑在抗药株内活化减少。本课题对Fd基因及蛋白质的研究将有助于阐明阴道毛滴虫抗药株抗性机制。 本研究分两个部分,第一部分:目的:Fd基因的克隆。方法:从我国四川地区临床分离阴道毛滴虫(阴道毛滴虫四川分离株—1),应用螯合树脂