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目的:探讨信号转导与转录因子3(Signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)在HER2阳性BT-474乳腺癌细胞拉帕替尼耐药中的作用及其相关分子机制,确定相关的耐药靶点,为临床治疗拉帕替尼耐药乳腺癌提供依据。方法1、逐渐增加拉帕替尼药物浓度(0.2、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)处理细胞加以诱导,维持6个月,使细胞获得稳定耐药性,建立BT-474耐药株(BT-474R)。2、Caspase-Glo~?3/7法检测拉帕替尼BT-474R耐药细胞与BT-474亲本细胞的Caspase3/7酶活性的变化,MTT法检测BT-474R细胞的IC50值。3、RT-qPCR检测BT-474亲本细胞及耐药细胞中IL-6及IL-6R mRNA的表达。4、Western blot检测耐药标志蛋白P-gp的表达、BT-474亲本细胞和耐药细胞中IL-6、p-STAT3、STAT3、cleaved caspase 3的蛋白表达水平以及RNAi法沉默STAT3基因后IL-6、p-STAT3、STAT3、cleaved caspase 3的蛋白表达水平。5、Caspase-Glo?3/7法和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测沉默后细胞凋亡程度。结果BT-474R组P糖蛋白(P-gp)表达水平比BT-474亲本细胞组显著增加(P<0.05)。BT-474R细胞IC50值是BT-474亲本细胞的12.7倍;拉帕替尼诱导IL-6的分泌并增强STAT3的活性;沉默STAT3基因表达可恢复BT-474R细胞对拉帕替尼敏感度,增加cleaved caspase3的蛋白表达水平和Caspase 3/7酶的活性(P<0.01)。沉默STAT3增强了拉帕替尼诱导的耐药细胞凋亡(P<0.01)。拉帕替尼诱导的IL-6表达和分泌激活STAT3,用IL-6抗体抑制拉帕替尼诱导的IL-6,可以阻止拉帕替尼刺激STAT3活性。结论1、BT-474R耐药细胞株模型已经成功构建。2、STAT3的激活在拉帕替尼耐药中发挥了重要作用。3、拉帕替尼可能通过诱导BT-474细胞分泌IL-6激活STAT3信号通路增加HER2阳性乳腺癌细胞对拉帕替尼的耐药性。