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在动物体内蛋白质必须被降解成游离氨基酸(free amino acid,FAA)或2~3氨基酸残基的小肽(small peptide,SP)才能被肠道所吸收,因此有关肠道氨基酸肠吸收的研究一直是动物营养学领域中的热点问题。对小鼠、大鼠、兔、畜禽动物以及人类的肠吸收机制已进行了大量的研究(Matthews et al,1965;Rerat,1988;Monchi& Rerat,1993;Tarvid,1995),但目前对斑点叉尾鮰肠道对氨基酸吸收机制的研究较少,尤其是吸收动力学研究未见报道。 本文通过三个试验探讨10种必需氨基酸在斑点叉尾鮰肠道内的吸收及其转运动力学,旨在为斑点叉尾鮰乃至水产动物的蛋白质及氨基酸营养研究提供一些基础理论数据和一种简便有效的研究方法。现将主要结果总结如下: 试验一:离体肠道灌注法研究肠道AA吸收、转运的可行性探讨。运用肠道离体灌注方法对斑点叉尾鮰进行试验,其结果表明:该方法测定肠道对氨基酸吸收和转运灵敏度较高,通过测定流经肠道的氨基酸灌注液浓度的变化能正确反映肠道对氨基酸的吸收规律,通过测定肠道培养液中的氨基酸浓度变化,能正确反映肠道对氨基酸的运输规律。同时,利用该实验系统时,灌流时间控制在1hr以内、氨基酸灌注液浓度在1~10mmol/L时,其实验结果具有可靠性。 试验二:斑点叉尾鮰肠道对10种EAA吸收及跨壁运输动力学研究。该试验运用试验一的实验方法,分别测定了斑点叉尾鮰肠道对10种EAA吸收量、吸收速率、跨壁运输量随时间和浓度的变化关系,比较分析了10种EAA吸收和跨壁运输的动力学差异。结果表明: (1)在0~21min内,肠道对氨基酸的吸收量随时间的变化呈线性相关。在0~60min内,跨壁运输量随时间变化的曲线存在一定的差异:在0~20min,Arg、Lys和Val的跨壁运输量增加速率较快,而Leu、Ile、Thr、Trp和His在前20min增加较慢,增加快慢体现在曲线斜率在不同时间的存在差异上;在后20~60min,它们的变化曲线均呈线性增加;Phe和Met的曲线变化在0~60min内呈直线相关。 (2)AA浓度对吸收量的影响有显著差异:不同浓度下,用最小显著极差法检测10种EAA吸收量的差异性分析表明:在alpha=0.01时,Trp、Met、His、Leu、Ile、Thr有极显著差异(ΔS>LSR0.05),Trp的吸收量最小,而Thr的吸收量最大;在相同浓度时,各氨基酸之间最大吸收量有显著差异(P<0.05)。 (3)AA浓度与跨壁运输量的关系:同一氨基酸随着浓度的增加,培养液中各氨基酸的积累速度明显加快;在1~5mmol/L时,跨壁运输量变化不显著,在5~10mmol/L时,跨壁运输量随浓度变化差异显著。不同氨基酸之间,不同浓度下的最大跨壁运输量Ile、Leu、Trp、Thr随浓度的增加不成线性相关;Phe、Arg、Lys、Met、His的跨壁运输量随浓度的增加呈现正相关。 斑点叉尾烟肠道对 10种 EAA吸收动力学的研究 (4) Phe、仰、Val、Leu、Afg、lie、M耐、Lys、His、hr吸收动力学常数依次为:K.;;:1.1刀、1二35、1.93、2刀22、4.118、5.024、5.101、5.19吕、5.341、5.502;人。:1.176、1刀1卜1.545、1.777、1.353、2*48、3.449、2.1吕9、2.56o、6刀二4。 试验三:*Lys、L*幻、卜11*或卜k*、卜Val、卜*h对卜*u、卜11e对卜uU、L-lie吸收抑制动力学的研究。该试验采用试验一的实验方法,测定了斑点叉尾蛔肠道Val、Phe、Lys、Met、lie(或Leu)对L一Leu、Life的吸收抑帘动力学,比较了10川川卜八八们.时收0.Z、0’v们刊们*、’吸收训个’川、帅MI浓腴阶g化义系..夕.’;以人山】: 玉)在 0~21min内,混合AA的吸收量(Ns十fief +Zmmow 和 LeAlle 3+Zmmol/L时除外)和跨壁运输量随时间的变化主要表现为线性相关关系,在变化趋势上与单一AA I4相似。 C)对 Leu和 lie吸收匠的影响存在差异:Val、Phe、Lys分别与* 混合的吸收量要小于与Leu混合的吸收量,Met对Leu和* 吸收量的影响不显著,主要表现为部分 fill线发生交叉。Leu和 lie之间存在显著的相互抑制作用。 *)混合氨基酸的最大吸收量和最大跨壁运输量存在差异:Lys刊、Lys+Leu的最大吸收量在不同浓度下其吸收量显著大于其它混合氨基酸0.05);Met+Leu、的e刊1e的吸收量显著小于其它混合氨基酸o<O,05卜从最大跨壁运输量的比较发现,混合氨基酸的跨壁运输量并不随着其浓度的增加而增加,其大小没有一致的规律。 WVal、Phe、Lys、Met、Leu(或*)分另对Leu和lie的吸收速率有不同的影响。敞浓度的增加,地八虽KZ酸w1十ku十11c、Me+hu、*幻十ku十11c以及*u十nc的吸收速率分别小于其单个氨基酸;混合氨基酸bs+Leu+lie的吸收速率大于其单个茂某酸,Phc+Ilo的吸收速率介于两者之仰。 O厂 组地合氨基酸的地率一浓度创力学曲线变化趋势农现为:Val在 l~3mmol儿时,对 Leu和 lie的抑制作用较弱,在 5~10mrnow时,抑制作用增强;Phe对 Leu、*et对ku和1卜、ku与1卜之间在1一3**。1儿时抑制作用较强,在5~10**。!几时抑制作用减小;Phe对* 的影响较小或没有;Lys对