阿卡波糖产生菌育种新方法的研究与应用

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α-葡萄糖苷酶抑制剂—阿卡波糖是治疗Ⅱ型糖尿病的一种新药,它通过与葡萄糖苷酶发生竞争性抑制作用从而达到降低餐后血糖的目的。因阿卡波糖的化学结构比较复杂,目前阿卡波糖工业规模的生产都是通过微生物发酵实现的。 本论文通过创立阿卡波糖产生菌的原生质体诱变技术、固体发酵技术和阿卡波糖含量快速测定技术,并把这些新技术结合应用,建立了高效的阿卡波糖产生菌诱变筛选方法。将该方法应用在阿卡波糖产生菌的诱变育种中,取得了非常显著的效果。 本论文首先对阿卡波糖产生菌-游动放线菌Actinoplanes sp.的原生质体制备条件和再生条件进行了考察。通过改进制备条件和再生条件使原生质体制备量达到8.0×107/mL左右,再生率达到8.0%左右,基本达到了原生质体诱变的要求。 然后,本论文对阿卡波糖的固体发酵条件进行了探索,建立了适合固体发酵阿卡波糖的工艺条件。在建立了固体发酵方法的基础上,本论文又创立了测定固体发酵后阿卡波糖含量的快速测定方法。将这些新的技术结合使用,本论文建立了高效的阿卡波糖产生菌诱变筛选方法,加快了筛选的速度,节约了筛选的成本。 本论文还考察了适于原生质体诱变的诱变剂种类和最佳诱变剂量;并建立了胺离子耐受及麦芽糖耐受的理性化筛选模型。 通过应用新的诱变筛选方法,筛选得到一株NH4+调节突变菌株AC-N1,其传代稳定,发酵单位达到3700μg/ml左右,约是原始出发菌株发酵单位的2.2倍。以AC-N1菌株为对象,通过正交设计实验初步优化了发酵培养基的组成,经摇瓶发酵,发酵单位达到4300μg/mL左右,约是原始出发菌株发酵单位的2.7倍。最后,通过摇瓶补料试验使单位又提高了22.4%,批产量提高了76.3%。
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