目的:肝癌是我国常见的恶性肿瘤,目前的研究显示肝癌可能来源于癌干细胞。本实验包含三个方面的内容:⑴从肝癌细胞系PLC/PRF-5中分离、鉴定癌干细胞样细胞亚群。⑵研究肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG₂的表达和成瘤的关系。⑶应用miRNAs芯片筛选肝癌细胞系PLC/PRF-5差异表达miRNAs,为进一步研究其在肝癌发病机制中的作用打下基础。方法:⑴应用流式细胞仪检测ABCG₂⁺在肝癌细胞系PLC/PRF-5中的表达,应用免疫磁珠分选（MACS）法对肝癌细胞系PLC/PRF-5进行ABCG₂⁺细胞与ABCG₂^-细胞的分选,流式细胞仪鉴定分离的纯度,观察ABCG₂⁺细胞与ABCG₂^-细胞的增殖及软琼脂克隆形成能力。将分选的ABCG₂⁺细胞与ABCG₂^-细胞分别以5×10³、1×10⁴、5×10⁴、5×10⁵个密度接种于NOD/SCID小鼠腋窝下,6周后处死小鼠观察成瘤率。⑵应用mirVana RNA Isolation Kit法抽提ABCG₂⁺细胞和ABCG₂^-细胞的总RNA,利用基因芯片技术,将细胞miRNA与哺乳动物miRNA芯片杂交,采用Agilent Scan Control software version A.7.0和Agilent Feature Extraction （FE） software version 9.5进行数据分析。结果:⑴对肝癌细胞系PLC/PRF-5进行流式细胞仪检测,ABCG₂⁺细胞比例在5.58～17.10%。将肝癌细胞系PLC/PRF-5中分选出的ABCG₂⁺细胞用流式细胞仪检测,其纯度为80%以上。生长曲线显示肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG₂⁺细胞体外增殖能力明显强于ABCG₂^-细胞（P<0.05）。软琼脂克隆形成能力实验中ABCG₂⁺细胞比ABCG₂^-细胞形成更多更大的克隆集落（P<0.05）。⑵NOD/SCID小鼠成瘤实验显示, ABCG₂⁺细胞组在1×10⁴个细胞时可以成瘤,而ABCG₂^-细胞组最少需要5×10⁵个细胞。在相同的接种量下（5×10⁵个细胞）,ABCG₂⁺细胞组的肿瘤体积均大于ABCG₂^-细胞组。⑶miRNA芯片结果显示,ABCG₂⁺细胞与ABCG₂^-细胞表达的miRNA中有20个存在明显差异（fold change〉2.0）,其中13个上调表达和7个下调表达。结论:肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG₂⁺细胞具有肿瘤干细胞的特性:自我更新能力、无限增殖能力、更强克隆形成能力和更强的致瘤性。