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第一部分改良Heron法大鼠同种异体心脏移植模型的建立【摘要】目的采用成熟的Heron法即颈部袖套血管吻合法建立一个简便,稳定可靠的大鼠同种异体心脏移植模型。方法以SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,两者均为清洁级,采用改良的颈部套管法(Heron法)建立大鼠同种异体颈部心脏移植模型。供体鼠全身肝素化后,用Custodiol(HTK)液使其心脏停跳,并迅速取下,备用;采用改进的套管技术通过自制Cuff管将Wistar大鼠供心的升主动脉、肺动脉分别与SD大鼠受体的右侧颈总动脉、颈外静脉分别进行吻合连接,开放血管夹,恢复供心血供。结果供心复跳,成功建立大鼠同种异体颈部心脏移植模型,本试验进行正式试验24次,全组无手术死亡,30s内移植心脏复跳率100%。结论应用改良的颈部套管法(Heron法)可以成功建立大鼠颈部心脏移植模型,方法简便、易于复制、成功率较高;该模型是一种非常实用的心脏移植模型。第二部分FK506联合FTY720对大鼠同种异体心脏移植术后T细胞亚群及免疫功能的影响【摘要】目的研究他克莫司(FK506)联合新型免疫抑制剂FTY720对同种异体心脏移植术后急性排异反应的抑制作用,并探讨FK506和FTY720合用的作用原理以及两者是否有协同作用。方法采用大鼠异体异位移植模型,将心脏移植于颈部。术后分别进行不同免疫治疗,于移植术后第7 d检测外周血T细胞亚群分布和血清IL- 2含量,同时观察心脏移植术后移植心脏的病理改变。实验分单纯应用FK506组、单纯应用FTY720组以及联合应用FK506和FTY720组,以异体异位移植术后不用药为对照组, FK506和FTY720用生理盐水配成溶液,术后从0～7天根据分组情况用FK506 (0.2mg/kg/d),FTY720 (3mg/kg/d)灌胃,每日触摸供心,观察供心搏动强度及心率,按预定时间,取供心组织标本进行病理学染色,比较同一时期不同处理下供心排斥反应的强度;应用ELISA、流式细胞仪等检测外周血T细胞亚群分布和血清IL- 2含量。从而探讨FK506和FTY720合用的可能作用机制及其对受体鼠移植心脏的影响。结果单独用药组与不用药对照组比较,供心存活时间明显较不用药组长且具有显著意义(P<0.01);移植心脏病理改变明显减轻,联合用药组又明显轻于单独用药组,供心组织HE染色显示术后7d时用药组免疫排斥反应较对照组明显减轻,其中尤以(FK506+ FTY720)组排斥反应最弱;外周血流式细胞仪检测表明各用药组外周血CD4+T淋巴细胞明显低于未用药组,单独用药组和联合用药组在术后受鼠外周血淋巴细胞数目明显减少,且CD4+,CD8+的T细胞数均减少,而对照组则无上述改变;ELISA测定显示术后使用(FK506+ FTY720)治疗的受鼠外周血中IL- 2水平较对照组明显减少,且具有显著意义(P<0.01)。结论1. FK506和FTY720都可以通过抑制CD4+T淋巴细胞增殖而阻止或延缓同种异体心脏移植的急性排异反应。2.急性排异反应时的细胞免疫过程中,CD4+T细胞首先被活化,继而释放IL- 2等细胞因子,然后使CD8+T细胞增殖分化为效应细胞。3.FK506与FTY720联用具有协同作用,可更有效地产生免疫抑制作用,在同种器官移植免疫治疗方面具有很好的开发应用前景。