槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的研究

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhu_2009
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目的:以人肺腺癌细胞A549为研究对象,通过不同方法研究槐耳清膏对A549细胞的生长抑制和诱导凋亡的影响,并初步研究其诱导凋亡的作用机制,为进一步深入研究其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制奠定基础,也为应用槐耳清膏治疗肺癌提供理论和基础实验依据。方法:应用MTT法检测该药对A549生长抑制作用;倒置相差显微镜、荧光倒置显微镜下观察A549的形态学变化;离心柱式DNA抽提试剂盒提取肿瘤细胞DNA后,应用琼脂糖凝胶电泳分析槐耳清膏对A549的凋亡诱导作用;流式细胞仪检测凋亡细胞以及分析细胞周期;采用免疫印迹法检测p53、bcl-2的蛋白水平变化。结果:MTT法检测槐耳清膏对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用的结果发现随着药物浓度的升高而增强,到3mg/ml时达到高峰;随着药物作用时间延长,细胞生长抑制率随之增加,不同浓度药物作用到36h均达到高峰,其中3mg/ml槐耳组细胞生长抑制率均值为39.3%,与顺铂阳性对照组36小时相比,差异无显著性(P>0.05);经过槐耳清膏处理后的A549细胞在倒置相差显微镜下可以见到细胞变形,细胞膜完整但是周围有发泡现象,晚期能看到细胞膜皱缩、凹陷,甚至出现凋亡小体;荧光染色可以看到浓染致密的荧光颗粒,新月形改变,固缩或者片段化的细胞核;DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯形条带;流式细胞术检测可见药物处理后的A549细胞其DNA直方图上出现亚二倍体的凋亡峰,而且周期分析发现槐耳清膏能够阻止A549细胞由S期进入G2/M期;免疫印迹法检测显示,槐耳清膏处理后的A549细胞中p53蛋白的表达增强,而bcl-2蛋白的表达减弱。
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